浙江省科技攻关计划(2004C13041)
- 作品数：6 被引量：13H指数：3
- 相关作者：陈枢青潘映秋孙红颖应跃斌李丹曦更多>>
- 相关机构：浙江大学北京中医药大学杭州国光药业有限公司更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性被引量：6
- 2006年
- 目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。
- 薛乔应跃斌潘映秋李丹曦孙红颖陈枢青
- 关键词：超抗原大肠杆菌MTT法
- 重组金葡菌肠毒素O的克隆表达及生物学活性分析被引量：3
- 2007年
- 克隆金葡菌肠毒素O(SEO)的全长基因,实现其可溶性表达,并对纯化的表达产物进行生物学活性分析。从金葡菌FRI 100菌株基因组中得到SEO基因,克隆至谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌,获高效表达。融合蛋白GST-SEO经Glutathione Sepharose 4B亲和纯化和凝血酶消化获重组SEO(rSEO)后,MTT法检测脾淋巴细胞的增殖作用,分析纯化后rSEO的生物学活性。测序结果表明,得到正确的肠毒素SEO基因序列,并获高效表达的融合蛋白;MTT结果表明,rSEO具有与SEC相当的显著的促淋巴细胞增殖以及抑制肿瘤细胞生长的能力。本研究成功克隆、表达、纯化了具有抗肿瘤生物学活性的rSEO蛋白,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤机制奠定了基础,并有望成为一种新的超抗原制剂用于肿瘤的临床治疗。
- 潘映秋丁丁孙红颖陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原重组蛋白
- 金黄色葡萄球菌肠毒素E的克隆表达及其生物活性研究被引量：4
- 2008年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素E(SEE)基因,获得重组SEE蛋白(rSEE),并对rSEE进行生物活性分析。方法通过PCR从金黄色葡萄球菌FR1326菌株基因中得到肠毒素SEE的成熟肽基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化,通过MTF法研究其生物活性。结果成功构建了SEE的表达载体,并得到高纯度的重组蛋白。MTY法结果表明,rSEE具有良好的促淋巴细胞增殖的能力以及肿瘤细胞的杀伤活性。结论具超抗原活性和高纯度的rSEE,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤机制,构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。
- 张伟潘映秋陈枢青
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素超抗原生物活性
- 金黄色葡萄球菌肠毒素Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:制备稳定分泌抗金黄色葡萄球菌肠毒素(SEI)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体的性质进行鉴定。方法:以SEI蛋白免疫Balb/c小鼠,利用细胞融合技术,经ELISA检测筛选及3次有限稀释,获得目的杂交瘤细胞株;采用杂交瘤细胞免疫小鼠,制备并纯化了单克隆抗体,并对所获得的单克隆抗体进行性质鉴定。结果:最终获得了两株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞8F7与D8,两者分别为IgG2b型与IgG1型;亲和常数分别为9.215×108L.mol-1和1.968×1010L.mol-1;两者均有较强的特异性,与纯化的SEG、SEE、SEC及金黄色葡萄球菌上清液均未有交叉反应;相加实验表明两个单克隆抗体识别的为相同表位。结论:单克隆抗体的成功制备,为初步建立肠毒素SEI的双抗夹心测定方法奠定了基础。
- 徐君英丁丁孙红颖陈枢青
- 关键词：杂交瘤免疫球蛋白G
- 野生型金黄色葡萄球菌肠毒素C2在E.coli中的表达和纯化研究
- 2006年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因在E.coli重组表达,纯化重组SEC2(rSEC2)并进行生物学活性分析。方法PCR获得正确编码SEC2的基因片断,构建表达质粒pET-28a-sec2在E.coliBL21中表达。利用离子交换和分子筛色谱纯化rSEC2,四甲基偶氮唑盐(MTT)法对rSEC2和天然SEC2(nSEC2)生物学活性进行分析和比较。结果可溶性rSEC2占菌体总蛋白质的40%,两步纯化后蛋白质纯度约达95%,rSEC2和nSEC2均具有显著的超抗原活性。结论成功获得与nSEC2有着类似活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白质的抗肿瘤机理奠定物质基础。
- 马凤森应跃斌陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原阴离子交换色谱四甲基偶氮唑盐法
- 重组金黄色葡萄球菌肠毒素C2的表达及生物学活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素C2(SEC2)基因,添加亲和纯化标签进行原核表达,并对表达产物进行生物学活性分析。方法通过PCR从pGEM-T-SEC2质粒中亚克隆得到带有编码6个组氨酸的核苷酸序列的基因片断,构建了表达质粒pET-28a-SEC2,转化至大肠杆菌BL21中诱导表达。利用亲和层析纯化rSEC2,并采用MTT法对纯化后的rSEC2和天然SEC2生物学活性进行研究和比较。结果表达质粒pET-28a-SEC2通过测序,表明已连入正确表达目的蛋白的核苷酸序列。含有该质粒的表达菌株经IPTG诱导,产生约占菌体总蛋白40%的可溶性重组蛋白。SDS-PAGE显示,经Ni2+亲和柱纯化的目的蛋白达到了电泳纯。MTT法表明该rSEC2和天然SEC2均有显著的超抗原活性。结论成功构建了pET-28a-SEC2表达质粒,获得了与天然SEC2有着类似超抗原活性的高纯度rSEC2,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤活性奠定了基础。
- 应跃斌李丹曦潘映秋薛乔孙红颖陈枢青
- 关键词：肠毒素超抗原克隆表达组氨酸标签
