安徽省自然科学基金(11040606M90)
- 作品数:3 被引量:1H指数:1
- 相关作者:刘雪兰余为一王琛陈芳芳孙菲菲更多>>
- 相关机构:安徽农业大学中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金:安徽省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- 鸡J亚群禽白血病病毒AH-J11株的全基因组感染性克隆构建
- 2013年
- 为探究鸡J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的致病机理,采用PCR方法分4段分别扩增出J亚群禽白血病病毒安徽分离株AH-J11的前病毒cDNA,PCR产物经克隆鉴定,酶切后顺次连接,获得含有完整ALV-J AH-J11株前病毒cDNA的重组质粒,命名为pSK-AH-J11。将AH-J11株全基因序列克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中,得到重组质粒pBl-AH-J11,并将其转染鸡胚成纤维细胞(CEF)。通过间接免疫荧光试验,RT-PCR和Western blot检测,并经测序验证比对拯救前后病毒的gp85基因序列,结果均表明拯救出了1株重组J亚群禽白血病病毒(rALV-J)。本研究成功构建了鸡ALV-J的感染性克隆并救获了其重组病毒,为研究禽白血病的致病机理提供了良好的反向遗传操作技术平台。
- 王蓓刘芳王汉清李宁魏建忠刘光清王桂军
- 关键词:J亚群禽白血病病毒全基因组感染性克隆病毒拯救
- 鸡恒定链功能片段跨物种增强小鼠对新城疫F2抗原免疫作用的研究被引量:1
- 2014年
- 【目的】研究恒定链(Invariant chain,Ii)功能片段作为载体的跨物种免疫增强作用及其潜在机制。【方法】构建基于鸡Ii功能片段与新城疫病毒抗原表位F2的嵌合体(Ii-F2、Cyt/Tm/Ii-key/F2/AP、Tm/Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2/AP、Ii-key/F2),将其定向克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并用IPTG诱导表达,嵌合体融合蛋白纯化后免疫小鼠,用ELISA法测定血清抗体效价。同时,分别构建含鸡Ii和小鼠MHCⅡ类分子基因的真核表达载体,并将其共转染COS7细胞,通过激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的共定位。【结果】用F2与Ii-key等Ii功能片段连接的融合蛋白免疫的试验组小鼠的抗体效价,较单独用F2抗原肽免疫的对照组小鼠产生的抗体效价提高了1.5~3倍。显微观察发现,鸡Ii和小鼠MHCⅡ分子在细胞内可以共定位。【结论】Ii具有跨越物种限制增强免疫的作用。
- 王琛刘雪兰陈芳芳余为一
- 关键词:嵌合体
- 寄生虫基因功能研究的模式生物-秀丽隐杆线虫
- 2011年
- 多细胞生物在发育的特定时期、特定组织中的表达某些基因。如果这些基因表达调控受到干扰则可能对机体产生有害的影响,而这对于寄生虫病来说则是一种潜在的控制其发病的新机制。
- 刘雪兰孙菲菲李培英余为一
- 关键词:基因功能秀丽隐杆线虫模式生物基因表达调控多细胞生物