陕西省卫生厅科学研究基金(06D40)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：西安交通大学口腔医院西安交通大学医学院第二附属医院更多>>
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- rAAV-hBMP2-GFP载体感染滴度测定方法的建立
- 2010年
- 目的建立携骨形态发生蛋白2基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-hBMP2-GFP)感染滴度测定的方法,并制备高滴度的rAAV-hBMP2-GFP病毒液,为进一步实验hBMP2诱导大鼠牙槽骨骨缺损修复的基因治疗提供有利的工具。方法通过分析腺相关病毒-HT1080(AAV-HT1080)细胞接种量、培养时间及病毒吸附时间等参数,建立应用荧光计数法测定rAAV-hBMP2-GFP病毒感染滴度的方法,并分析其精密性及检测病毒的稳定性。结果 AAV-HT1080细胞的最佳接种浓度、培养时间及病毒吸附时间分别为3×105个/孔、24h及48h,在此条件下收获的病毒液的感染滴度最高可达3.82×1011/ml,所建立的荧光计数检测方法精密性较好。制备的病毒液的平均感染滴度为3.60×1011/ml,4℃和37℃保存7d及反复冻融5次,稳定性良好。结论建立了rAAV-hBMP2-GFP感染滴度的测定方法,并制备了高滴度及滴度稳定的rAAV-hBMP2-GFP病毒液。
- 王敏程政姚天华代泉郭秀全
- 人骨形态发生蛋白2基因治疗大鼠牙槽骨缺损的实验研究被引量：5
- 2010年
- 目的:观察重组腺相关病毒(rAAV)介导的人骨形态发生蛋白2(hBMP2)对大鼠实验性牙槽骨缺损的修复作用。方法:将30只实验大白鼠随机分为实验组和对照组。在两组动物下颌1 1牙间牙槽骨人工制备2mm×2mm骨缺损区。实验组骨缺损区植入浸有携目的基因hBMP2和标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺相关病毒液(rAAV-hBMP2-GFP)的明胶海绵块,对照组植入只浸有携GFP的空病毒液(AAV-GFP)的明胶海绵块。术后15d、30d、60d分别处死动物,进行放射学和组织学观察。结果:1两组样本牙槽骨缺损处的骨密度值随时间的增加而增高;在15d、30d、60d,实验组样本牙槽骨缺损处骨密度值(0.062,0.236,0.456)均高于对照组(0.054,0.158,0.216),其中30d、60d两组有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。2术后15d两组样本牙槽骨缺损处周边组织均可见到GFP;术后30d、60d,实验组样本较对照组绿色荧光强度明显加强。3实验组:术后15d,牙槽骨人工缺损区周围成纤维细胞和毛细血管生长活跃,周边有骨样组织和少量的骨组织形成。术后30d,骨缺损处新骨数量增多。术后60d,缺损区几乎被新生骨组织充满;对照组:术后15d可见少量炎性细胞,成纤维细胞和毛细血管生长活跃;术后30d,骨缺损区周边可见成骨细胞和少量骨样组织;术后60d,骨缺损区边缘有少量新骨沉积,腔内被纤维组织充满。结论:rAAV-hBMP2-GFP成功修复大鼠实验性牙槽骨缺损。
- 王敏程政姚天华代泉郭秀全
- 关键词：骨形态发生蛋白质类基因疗法牙槽骨质丢失
- pAAV-hBMP2-IRES质粒的构建及病毒包装被引量：3
- 2009年
- 目的:构建含人骨形态发生蛋白2(hBMP2)基因的重组腺相关病毒载体。方法:根据hBMP-2基因序列设计引物,上游引入SalI酶切位点,下游引入EcoRI酶切位点,以胚胎骨髓组织总RNA为模版进行rt-PCR反应扩增hBMP-2基因。将hBMP-2片段定向亚克隆进pAAV-IRES-GFP的MCS中,获得重组表达质粒(pAAV-hBMP2-IRES-GFP),采用磷酸钙沉淀法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染到AAV293细胞,进行rAAV-hBMP2-IRES-GFP重组病毒包装。收获的病毒液按氯仿处理、PEG/NaCl沉淀、氯仿反复抽提法浓缩纯化,采用荧光计数法测定重组病毒感染滴度。结果:酶切鉴定、测序结果表明,hBMP2成功克隆入pAAV-IRES-GFP载体中。在AAV293细胞中包装出重组腺相关病毒载体的感染滴度为3.6×1011/ml。结论:成功制备了rAAV-hBMP2载体,可满足骨组织工程的需要。
- 程政王敏石建峰时志斌
- 关键词：人骨形态发生蛋白腺相关病毒骨组织工程
