吉林省科技厅资助项目(3D510X806604)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 龙牙楤木三萜皂苷合成途径关键酶AeFPS基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2011年
- 目的克隆龙牙楤木法呢二磷酸合成酶(AeFPS)基因并进行原核表达。方法以龙牙楤木为材料,采用RT-PCR方法,设计特异引物,克隆AeFPS基因,并将该基因定向插入Sca I/BamH I切开的原核表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21,于28℃,IPTG诱导5 h,经SDS-PAGE电泳分析,检测出明显的差异条带,Western blotting进一步检测其为目的基因。结果克隆到AeFPS基因cDNA全长为1 040 bp,含有1 029 bp的开放阅读框(ORF),编码342个氨基酸,GenBank登录号为HM219226.1。成功构建了原核表达质粒pET28a/AeFPS、AeFPS蛋白在BL21中高度表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定了目标蛋白。结论首次获得了AeFPS基因,并将其连入原核载体中成功表达,为研究AeFPS蛋白的活性及生化功能奠定了基础。
- 赵春彦成慧贾冬梅邹宏达原亚萍吴颖
- 关键词：原核表达克隆
