博士科研启动基金(07B21)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 兔抗多疣壁虎Hoxc10抗血清的制备及鉴定
- 2011年
- 目的:制备兔抗多疣壁虎Hoxc10抗血清并进行特性鉴定。方法:构建pGEX-4T1-g-Hoxc10质粒,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-g-Hoxc10蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备Hoxc10抗血清。用Western blot和免疫组化染色法检测Hoxc10抗血清的特性。结果:构建的多疣壁虎Hoxc10基因的原核表达质粒pGEX-4T1-g-Hoxc10,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的Hoxc10融合蛋白,以其免疫大白兔获得较高效价的Hoxc10抗血清。Western blot及免疫组化染色法检测显示,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:利用原核表达的多疣壁虎GST-g-Hoxc10融合蛋白制备的Hoxc10抗血清效价高,特异性良好,为进一步深入研究Hoxc10的功能提供了重要的制剂。
- 周晓芳陆仁飞陈倩储钰丹王学谦钱天梅顾星星
- 关键词：多疣壁虎融合蛋白抗血清
- 多疣壁虎Fstl1基因表达及其在断尾损伤中的变化被引量：1
- 2010年
- 目的:研究多疣壁虎卵泡抑制素相似蛋白1(Fstl1)基因的表达及其在壁虎断尾损伤再生中的变化。方法:通过对多疣壁虎断尾损伤cDNA文库克隆测序获得Fstl1基因序列,并采用ClustalX软件比较GenBank同源蛋白进行系统进化分析。用Northern blot与原位杂交分析多疣壁虎Fstl1转录本大小及其在脊髓中的表达定位。通过RT-PCR方法研究Fstl1基因在壁虎主要组织中的表达分布与壁虎断尾损伤模型中变化。结果:基因系统进化分析表明,多疣壁虎Fstl1与人类Fstl1同源性较高,为96.5%;与爪蟾同源性较低,为62.9%。Northen blot分析表明,成年多疣壁虎Fstl1脊髓转录本大小约为3.7kb。原位杂交结果显示,多疣壁虎脊髓中Fstl1的阳性信号主要存在于灰质神经元细胞及室管膜细胞;而在断尾再生2～3周尾芽中,Fstl1阳性信号广泛存在于再生尾芽的新生区未分化细胞及间充质细胞,3周尾芽中,阳性信号还存在于软骨生成区。RT-PCR结果显示,多疣壁虎Fstl1基因在壁虎脑、脊髓、心、肝、肺、肾、卵巢、尾巴、肌肉中均有表达,其在脊髓中呈高表达。在断尾损伤模型中,多疣壁虎Fstl1表达呈动态变化,其在近端脊髓组织中,损伤3天时Fstl1转录表达增高,并随后开始下降恢复;在断尾再生尾芽中,3周时Fstl1转录表达低于2周表达量。结论:Fstl1基因主要分布于脊髓灰质神经元细胞中,Fstl1在壁虎断尾损伤后近端脊髓的表达呈动态变化,在再生尾芽表达3周下调。
- 钱天梅陆仁飞周晓芳陈倩储钰丹顾星星
- 关键词：多疣壁虎脊髓
