海南省教育厅高等学校科学研究项目(Hjkj2011-33)
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 相关作者：饶翔杨丞郑晶张弦王明华更多>>
- 相关机构：海南医学院中南大学海口市人民医院更多>>
- 发文基金：海南省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 顺铂诱导宫颈癌细胞上皮间质转化的研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究短时间应用顺铂是否会引起宫颈癌细胞株HCE1发生上皮间质转化(EMT),明确Twist1是否为调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子。方法采用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和免疫组织化学法分别从细胞形态、生长曲线和标志性蛋白E-cadherin、vimentin的表达情况。以HCE1细胞株为对照组,加顺铂组(终浓度0.1mg/L)为实验组,观察加入顺铂24、48、72、96h后,宫颈癌细胞株HCE1是否发生EMT及其时间点。采用Transwell小室实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力,免疫组织化学方法检测P糖蛋白(P-gp)蛋白表达证实EMT发生。半定量RT-PCR方法比较EMT前、后Twist1表达。结果低剂量顺铂处理HCE1 72h后,HCE1细胞形态发生EMT的改变;上皮细胞标志性蛋白细胞黏附分子(E-cadherin)表达减少、间质细胞标志性蛋白Vimentin表达增强,P-gp蛋白表达增强;对照组HCE1平均穿膜细胞数为(39.000 0±2.828 4)个,EMT组HCE1平均穿膜细胞数为(100.166 7±3.868 7)个;RT-PCR法测得Twist1/内参OD比值在对照组0.200 2±0.000 9,EMT组0.615 6±0.005 1,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低剂量顺铂早期即可诱导HCE1发生EMT,发生EMT的HCE1细胞体外侵袭能力和耐药性增强,Twist1是调控顺铂诱导宫颈癌细胞EMT的关键转录因子。
- 杨丞饶翔丁莉利王明华
- 关键词：宫颈肿瘤顺铂上皮间质转化肿瘤TWIST转录因子
- Twist基因转染对人宫颈癌细胞生物学行为影响的观察被引量：11
- 2013年
- 目的:构建人Twist基因真核表达载体,并建立稳定高表达Twist的人宫颈癌HCC94细胞系,研究转染前后HCC94细胞生物学行为。方法:用RT-PCR法扩增人低分化宫颈癌HCE1细胞中Twist开放阅读框架,将PCR产物克隆到pZsGreen-C1真核表达载体,构建重组质粒pZsGreen-C1/Twist并鉴定。采用脂质体法把重组载体转染入人高分化宫颈癌HCC94细胞,经G418筛选获得稳定高表达Twist的细胞克隆,并进行荧光,蛋白质印迹法和Realtime RT-PCR检测;MTT法和侵袭小室实验研究转染前后HCC94细胞的增殖、黏附和迁移能力。结果:成功构建pZsGreen-C1/Twist真核表达载体,筛选出稳定高表达人Twist的p-tw-1克隆,经荧光显微镜观察其转染效率>70%。Realtime RT-PCR扩增曲线和熔点曲线显示,Twist基因有效扩增,p-tw-1组、p-tw-v(转染空载体)组和HCC94(未转染)组mRNA相对表达量分别为4.14±2.26、2.03±1.10和1.90±0.78,p-tw-1组相对于其他两组水平明显上调,差异有统计学意义,F=10.24,P=0.001;而对照组之间差异无统计学意义,P=0.146。蛋白质印迹法检测结果显示,Twist基因稳定表达,p-tw-1组、p-tw-v组和HCC94组IOD与GAPDH比值分别为0.65、0.33和0.30。p-tw-1组细胞从第4天起生长趋势快于p-tw-v组和HCC94组,差异有统计学意义,F=24.113,P=0.000;而两对照组之间差异无统计学意义,P=0.229。P-tw-1、P-tw-v和HCC94组平均穿膜细胞数分别为(263.67±18.04)、(126.00±17.69)和(116.33±9.87)个,p-tw-1组细胞数明显增多,差异有统计学意义,F=83.093,P=0.000;p-tw-v与HCC94组之间差异无统计学意义,P=0.478。P-tw-1、P-tw-v和HCC94组黏附细胞平均A值分别为0.38±0.01、0.53±0.01和0.57±0.01,p-tw-1组A值明显降低,差异有统计学意义,F=65.086,P=0.000;p-tw-v组与HCC94组之间差异无统计学意义,P=0.244。结论:Twist基因高表达可增强宫颈癌细胞增殖和迁移能力,降低其黏附能力;Twist真核表达载体和稳定高表达Twist的HCC94细胞系构建为进一�
- 杨丞饶翔张弦郑晶
- 关键词：宫颈肿瘤转染细胞迁移
