重庆市科技攻关计划(20016755)
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
- 相关作者：彭远义李春明周泽扬刘生峰马丽苹更多>>
- 相关机构：西南大学西南农业大学更多>>
- 发文基金：重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 植酸酶基因工程菌的发酵研究
- 2006年
- 对植酸酶基因工程菌(E-22)发酵产植酸酶条件作的。研究结果表明,接种龄36h,接种量10%,增菌时间72h,发酵液pH6.0,甲醇添加量1.5%,装液量10%,诱导表达120h能很好的提高产酶,测得酶活164416.7IU/mL。发酵培养基中添加抗生素或表面活性剂对发酵产酶有一定的抑制作用。
- 何锡杲李健彭远义
- 关键词：植酸酶发酵基因工程菌抗生素表面活性剂
- 重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究被引量：1
- 2008年
- 对用黑曲霉植酸酶基因构建的一株重组酵母E22所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明E22植酸酶分别在pH2.5～3.0和pH5.5左右具有2个最适pH峰,有活性pH范围为pH2.0～7.5,pH2.5时的最适温度为45℃左右、对植酸钠的Km值为0.0002mol/L、比活为493328.7u/mg、受Fe2+抑制,pH5.5时的最适温度为55℃、对植酸钠的Km值为0.0001mol/L、比活为624376.2u/mg、受Ca2+和Zn2+抑制,85℃热处理10min酶活性保留70%,pH2.5下用胃蛋白酶、pH5.5下用胰蛋白酶处理6h后酶活均保留90%左右,分子量为61.7KD,等电点在4.5到5.0之间.
- 李春明彭远义
- 关键词：毕赤酵母植酸酶纯化
- 2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究被引量：3
- 2006年
- 对黑曲霉A 3214及其诱变株N14所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明A 3214植酸酶和N14植酸酶的最适pH均为2．5,最适温度均为50℃,60℃保温10 min后酶活保留均在80％左右,用胃蛋白酶处理后酶活均保留80％左右,分子量均为47．4 KD,等电点均在4．5到5．0之间,K+,Na+,Ca2+,Mg2+,Fe2+在高浓度时对A 3214植酸酶和N 14植酸酶都有抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+却几乎没有抑制作用,A 3214植酸酶对植酸钠的Km值为0．000 5 moL／L,N 14植酸酶对植酸钠的Km值为0．000 4 moL／L,A 3214植酸酶的比活为135 777．5 u／mg,N 14植酸酶的比活为148 447．5 u／mg。
- 李春明彭远义
- 关键词：植酸酶纯化
- 植酸酶产生菌黑曲霉N14的诱变选育及其基因分析被引量：6
- 2005年
- 以植酸酶产生菌黑曲霉03214为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得了产酶活性较出发菌株提高了22.3%,达422IU/ml发酵液的突变菌株黑曲霉N14,其最适pH值为2.5,最适温度为50℃。通过对黑曲霉N14植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了一条长约1.5kb的特异性产物。以pMD18 T为载体,构建了含有目的基因片段的重组质粒。DNA序列测定表明,目的基因片段含有植酸酶phyA基因的完整序列(GenBankAccession:AY426977),phyA基因全长1506bp,其中包含一段长102bp的内含子,编码467个氨基酸,有10个潜在的糖基化位点,5'端有一编码19个氨基酸的信号肽序列。实验结果为植酸酶基因工程菌的构建奠定了基础。
- 彭远义马丽苹李春明刘生峰周泽扬
- 关键词：植酸酶诱变PHYA基因
- 植酸酶基因工程菌的发酵研究被引量：2
- 2006年
- 对植酸酶基因工程菌(E-22)发酵产植酸酶条件作了初步研究。研究结果表明,接种龄36 h,接种量10%,增菌时间72 h,发酵液pH 6.0,甲醇添加量1.5%,装液量10%,诱导表达120 h能很好的提高产酶,测得酶活164 416.7U/mL。发酵培养基中添加抗生素或表面活性剂对发酵产酶有一定的抑制作用。
- 何锡杲李健彭远义
- 关键词：植酸酶发酵
- 黑曲霉N14植酸酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达被引量：19
- 2004年
- 从黑曲霉N14基因组DNA中扩增出植酸酶phyA基因表达片段 ,并将其克隆到pMD18 T载体中。以此片段构建了pPIC9K phyA重组表达载体 ,目的片段以正确的阅读框架插入到pPIC9K的多克隆位点EcoRⅠ和NotⅠ之间。重组表达载体经XbaⅠ线性化处理 ,电击转化毕赤酵母 ,经G4 18抗性筛选、酶活性测定、PCR鉴定和SDS PAGE分析 ,获得了两株产酶活性分别为 14 395 8 3u mL发酵液 (PP N14 2 2 )和 14 890 8 3u mL发酵液 (PP N14 4 4 )的高产工程菌 ,其酶活性分别是出发菌株酶活性 (4 2 2u mL)的 341 13倍和 35 2 86倍 ,重组酵母具有很好的遗传稳定性。重组植酸酶在pH值 2 5～ 3 0和 5 0～ 5 5时酶活性最高 ,且在pH4 5～ 6 5之间均有相当高的酶活性 ,最适作用温度为5 5℃。
- 彭远义刘生峰李春明周泽扬
- 关键词：植酸酶PHYA基因毕赤酵母
