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高山被孢霉△6脂肪酸延长酶基因的克隆及功能验证: 生产二十碳四烯酸（Arachidonic acid,AA）的高山被孢霉（Mortierella alpina）体内的脂肪酸延长酶MAELO（Mortierella alpina elongase）催化AA、EPA等生物合...; 兰昊魏东盛邢来君李明春; 关键词：高山被孢霉基因表达蛋白分析; 文献传递

小眼虫藻Δ~8-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达被引量：2: 2010年; Δ8途径是合成多不饱和脂肪酸的替代途径,Δ8-脂肪酸脱氢酶是该途径的关键酶之一。根据已报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从小眼虫藻基因组DNA和cDNA中扩增得到该基因片段,序列分析表明:结构基因长1266bp,编码421个氨基酸;该基因没有内含子,比已经报道的Δ8-脂肪酸脱氢酶基因长6bp,并且N末端序列也有所不同。利用酿酒酵母的载体pYES2.0构建Δ8-脂肪酸脱氢酶表达载体pYEFD,并转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在选择培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YD8。YD8在合适的培养条件下,添加外源底物二十碳二烯酸和二十碳三烯酸并诱导基因表达。脂肪酸甲酯气相色谱分析表明小眼虫藻Δ8-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效表达,将二十碳二烯酸和二十碳三烯酸分别转化成二高-γ-亚麻酸和二十碳四烯酸,其底物转化率分别达到了31.2%和46.3%。; 黎明欧秀元杨向东郭东全钱雪艳邢来君魏东盛李明春; 关键词：多不饱和脂肪酸

巴斯德毕赤酵母ppSpt23p对UFA脱氢酶基因调控作用研究: 多不饱和脂肪酸是在酶复合物的作用下由脂酰链脱氢形成的,脂肪酸脱氢酶在脂肪酸代谢以及维持细胞膜正常结构和功能方面有重要作用。巴斯德毕赤酵母Gs115（Pichiapastoris）作为一种能够产生多不饱和脂肪酸亚油酸和α-...; 魏东盛亓玉燕邢来君李明春; 关键词：巴斯德毕赤酵母; 文献传递

无选择标记转基因大豆表达载体的构建: 转基因大豆是世界上转基因作物中推广时间最早、推广面积最大、效益最高的转基因作物。然而,和所有其他转基因植物一样,构建的转基因大豆不仅含有目的基因,还含有选择标记基因,这; 黎明欧秀元魏东盛张代文邢来君李明春; 文献传递

毕赤酵母Δ^9-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达: 2010年; 根据真菌Δ9-脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行PCR,获得一个741 bp的毕赤酵母cDNA片段,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物,通过cDNA末端扩增技术(RACE)获得该cDNA的3′和5′序列,从而得到全长为1 689 bp的cDNA序列.序列分析结果表明,该序列具有一个长度为1 194 b p、编码397个氨基酸的开放阅读框(PPD9).与报道的Δ9-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区和疏水结构,在其氨基酸序列的C-末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区.该序列为一个新的编码Δ9-脂肪酸脱氢酶的基因,为了验证其功能,把开放阅读框序列PPD9亚克隆到表达载体pYES 2.0,构建重组表达载体pYPPD9,并转化到酿酒酵母的Δ9-脂肪酸脱氢酶缺陷型菌株DTY-11A中进行表达。通过平板互补实验结果表明,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的蛋白具有Δ9-脂肪酸脱氢酶活性,能弥补DTY-11A中由于Δ9-脂肪酸脱氢酶的缺失而引起的致死性突变。; 张昕欣魏东盛张飙邢来君李明春; 关键词：毕赤酵母酿酒酵母

三角褐指藻△^5-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：4: 2009年; △5-脂肪酸脱氢酶是合成花生四烯酸的关键酶。根据已报道的△5-脂肪酸脱氢酶基因设计引物,分别从三角褐指藻基因组DNA和总cDNA中扩增得到1520 bp和1410 bp的特异片段,序列分析结果显示,结构基因中含有一个大小为110 bp的内含子,这是国内外首次报道。将△5-脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2.0中,在大肠杆菌中筛选到含有目的片段的重组质粒pYPTD5,用电击转化的方法将重组质粒pYPTD5转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc1中,在缺省培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YPTD5。在合适的培养条件下,添加外源底物双高γ-亚麻酸和诱导物半乳糖,培养并收集菌体。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析,表明三角褐指藻△5-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达,将双高γ-亚麻酸转化为花生四烯酸,其底物转化率达到了45.9%。; 杨哲魏东盛邢来君李明春; 关键词：花生四烯酸酿酒酵母

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国家教育部博士点基金(20070055061)