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小叶锦鸡儿转录因子CBF/DREB1 cDNA全长的克隆: 2013年; 以旱生豆科植物小叶锦鸡儿为材料,利用RT-PCR和RACE方法克隆了CBF/DREB1基因cDNA全序列。结果表明:小叶锦鸡儿CBF/DREB1序列全长为1,022bp,包括565bp的开放阅读框(ORF),起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,包括128bp的5'UTR、279bp的3'UTR、加尾信号AATAAA和poly(A)12。; 刘伟刘贞杨冠宇伊莉佳李国婧王瑞刚; 关键词：小叶锦鸡儿 CBF RACE

柠条锦鸡儿CkLEA4基因克隆及表达分析被引量：7: 2014年; LEA蛋白是一种与植物抗逆相关的胚胎发育晚期丰富蛋白。该研究从已构建的柠条锦鸡儿干旱胁迫抑制削减杂交文库中筛选到1条LEA蛋白编码基因的部分序列,用RACE技术扩增得到该基因cDNA全长并对其进行了克隆。测序表明该基因cDNA长870bp,其中开放阅读框长510bp,编码169个氨基酸,推测蛋白分子量为17.03kD,等电点为9.3,是一种亲水蛋白。序列比对和系统进化分析表明,该基因属于LEA4基因家族成员,命名为CkLEA4。实时荧光定量PCR检测发现,CkLEA4基因在干旱、ABA和NaCl处理下均受到不同程度的诱导,说明CkLEA4基因可能与柠条锦鸡儿响应逆境胁迫有关。; 张燕娜于秀敏杨杞岳文冉王瑞刚李国婧; 关键词：LEA 基因克隆柠条锦鸡儿

柠条锦鸡儿肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆和分析被引量：7: 2014年; 肉桂酰辅酶A还原酶(cinnamoyl-CoA reductase,CCR)是木质素特异合成途径中的关键酶。根据已报道的植物CCR基因序列设计简并引物,利用RACE技术,首次从柠条锦鸡儿(Caragana korshinkii Kom.)中克隆得到CCR基因全长cDNA序列,命名为CkCCR,GenBank登录号为HQ829859。该序列长1 270bp,具备长度为1 014bp的完整开放阅读框(ORF)。推导该基因编码的蛋白质有434个氨基酸,预测等电点6.69,分子量36.76kDa。序列分析发现,柠条锦鸡儿CCR基因推导的氨基酸序列与其它植物来源的CCR序列高度相似,并且具有植物CCR共有的氨基酸序列"KNWYCYGKA"以及NADPH的结合序列。系统进化分析显示,柠条锦鸡儿CCR与拟南芥CCR2处于同一分支,与同属豆科的银合欢CCR亲缘关系最近。利用荧光定量PCR技术对柠条锦鸡儿一个月龄幼苗基因转录水平进行检测,结果显示CkCCR基因在根、茎、叶中广泛表达,并且干旱处理初期表达量有所下降,处理后期又恢复到未处理时的表达水平。; 李高杨杞张烨王颖张涛李国婧王瑞刚; 关键词：柠条锦鸡儿

柠条锦鸡儿香豆酸-3-羟化酶基因克隆及其功能初步研究被引量：12: 2013年; 香豆酸-3-羟化酶(Coumarate 3-Hydroxylase,C3H)是木质素生物合成途径中的关键酶之一。以柠条锦鸡儿为材料,利用RACE技术克隆了C3H基因。对柠条锦鸡儿C3H基因的gDNA和cDNA全长分析显示该基因具有3个外显子,2个内含子,编码框长度为1530bp,编码509个氨基酸。预测该基因编码蛋白的等电点位7.67,分子量约57.61kDa。氨基酸序列分析显示具有一个保守的P450结构域。系统进化分析表明该蛋白与大豆C3H具有最高的同源性,将该基因命名为CkC3H,GeneBank登录号为HQ829858。构建了35S启动子驱动的CkC3H基因植物表达载体,互补拟南芥C3H(CYP98A3)基因突变体ref8,转基因植物表型得以部分恢复。这些结果说明柠条锦鸡儿CkC3H与拟南芥C3H至少具有部分相同的功能。; 李高杨杞张烨王瑞刚李国婧; 关键词：木质素

柠条锦鸡儿CkLEA1基因克隆及表达分析被引量：7: 2013年; 植物受到逆境胁迫后,大量逆境响应基因会被诱导表达,LEA蛋白编码基因就是与植物抗旱、抗冷等非生物胁迫密切相关的一类基因。从已构建的柠条锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中筛选到了一条LEA蛋白编码基因并进行了克隆。序列比对与系统进化分析显示该基因属于LEA3基因家族成员,命名为CkLEA1(GenBank登录号是KC309408)。克隆得到该基因gDNA长469bp,包含两个外显子和一个内含子;cDNA长357bp,包含300bp的开放阅读框,推导编码99个氨基酸的蛋白质。利用荧光定量PCR技术对CkLEA1基因在各种逆境胁迫条件的表达情况进行初步研究表明,CkLEA1受干旱、ABA、冷、热、盐和碱等处理不同程度地诱导,推测其与柠条锦鸡儿响应逆境胁迫的机制有关。; 杨杞尹佳佳王颖王瑞刚李国婧; 关键词：LEA 基因克隆柠条锦鸡儿

外源激素对黄瓜抗病特性的影响被引量：4: 2014年; 研究了外源水杨酸(SA)、脱落酸(ABA)和茉莉酸甲酯(MeJA)对黄瓜抗白粉病和炭疽病特性的影响。研究结果表明:黄瓜分别经0.05 mmol/L SA、ABA和MeJA处理后,对白粉病敏感的黄瓜品种‘长春密刺’植株的病斑数目分别降低了26.3%、42.5%和44.7%,病斑直径分别降低了31.4%、37.1%和48.6%;对炭疽病敏感的黄瓜品种津杂2号,病斑数目依次降低了36.2%、44.7%和22.7%,病斑直径分别降低了25.6%、48.7%和30.8%。说明3种外源激素可能诱导了黄瓜自身抗病能力的提高。; 冯宗琪刘福军秦艳艳王瑞刚; 关键词：水杨酸脱落酸茉莉酸甲酯黄瓜

柠条锦鸡儿HCT基因克隆及序列分析被引量：7: 2014年; 根据已报道的植物木质素合成基因莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(HCT)的序列设计简并引物,利用RACE技术,首次从柠条锦鸡儿中克隆得到HCT基因全长cDNA序列,命名为CkHCT,GenBank登录号为KC895507。该序列长度为1 750 bp,具备长度为1 305 bp的完整开放阅读框(ORF),该基因推导编码的蛋白质有434个氨基酸,预测等电点6.42,分子量48kD。序列比对后发现,柠条锦鸡儿HCT基因推导的氨基酸序列与其它植物HCT序列高度相似。系统进化分析显示,柠条锦鸡儿HCT基因与同属豆科的三叶草、苜蓿和蝶豆的HCT基因亲缘关系最近。; 刘伟李高杨杞王颖李国婧王瑞刚; 关键词：柠条锦鸡儿 HCT RACE

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(ECNT-11-1020)