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人源核不均一核糖核蛋白E1真核表达载体在神经细胞中的表达被引量：3: 2014年; 背景:人源核不均一核糖核蛋白E1功能广泛,可参与神经系统骨架蛋白的表达。目的:为深入研究其在神经细胞中的作用,构建其真核表达载体,观察其在神经细胞中的表达。方法:利用真核表达载体pcDNATM4/His C,通过亚克隆构建核不均一核糖核蛋白E1-pcDNATM4/His C重组质粒,经酶切、测序鉴定,通过转染神经细胞SH-SY5Y,采用western-blot,RT-PCR鉴定核不均一核糖核蛋白E1重组质粒的表达,并观察转染细胞的生长现象。结果与结论:成功构建了核不均一核糖核蛋白E1的真核表达载体,mRNA和蛋白水平上均证实了该质粒可在神经细胞SH-SY5Y中正确表达。SH-SY5Y细胞在转染核不均一核糖核蛋白E1后表现为加速生长。提示该蛋白对神经细胞的生长发育具有重要的作用。该载体为进一步研究核不均一核糖核蛋白E1在神经系统中的功能提供了前提条件。; 霍丽蓉王兰英邹俊华钟南; 关键词：神经细胞国家自然科学基金

PCBP1对神经毒素6-OHDA诱导的小胶质细胞凋亡的影响: 2019年; 目的观察PCBP1对于神经毒素6-OHDA所介导小胶质细胞BV-2的细胞凋亡的影响.方法将空载质粒pEGFP-N1与PCBP1构建重组质粒,经酶切、纯化、测序鉴定,采用脂质体转染法将PCBP1基因转入小胶质细胞BV-2细胞系24h时,用不同浓度6-OHDA于不同时间分别刺激BV-2细胞,采用流式细胞仪对细胞周期进行检测.结果经测序鉴定显示成功构建PCBP1的真核表达载体.流式细胞仪检测:同等剂量6-OHDA对转染pEGFP-N1-PCBP1(实验组)和pEGFP-N1(对照组)的BV-2细胞作用不同时间后,实验组细胞的早期凋亡率较对照组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),而两组晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同剂量的6-OHDA对两组细胞作用24h后,实验组较对照组的细胞早期凋亡率明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),而两组晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 PCBP1对6-OHDA所介导的细胞早期凋亡率有一定的影响,有利于PCBP1在帕金森病中进一步研究.; 贾冰冰叶梦霍丽蓉; 关键词：BV-2 6-OHDA 转染

PCBP1相关生物功能的研究进展: 2018年; Poly(rC)-结合蛋白[poly(C)-binding proteins,PCBPs]具有高度亲和力,以及与多聚胞嘧啶结合的特殊序列。PCBPs在哺乳动物细胞中广泛表达,其包含4种亚型:PCBP1-4。在真核细胞中,PCBP1通过与基因启动子的特殊位点结合来发挥信号依赖与协调转录调控作用。PCBPs功能多样,通过酵母双杂交研究发现PCBP1在蛋白-RNA,蛋白-蛋白相互作用的层面更是参与多个功能环路,发挥了多种胞内作用。目前PCBP1在各个系统肿瘤,病毒感染,铁离子的转运等方面成为研究热点。本文就PCBP1的重要生物学功能进行相关综述。; 贾冰冰叶梦霍丽蓉; 关键词：DNA MRNA

PCBP1对6-OHDA作用的SH-SY5Y细胞凋亡影响的研究: 2019年; 研究核不均一核糖核蛋白(PCBP1)对6-OHDA作用的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法:构建含PCBP1的真核表达载体pEGFP/N1-PCBP1,转染SH-SY5Y细胞,用不同浓度6-OHDA对转染后SH-SY5Y细胞刺激不同时间后,流式细胞仪检测分析细胞凋亡率。结果:不同浓度的6-OHDA对转染PCBP1重组质粒的实验组和转染空质粒的对照组细胞作用24h后,实验组细胞早期凋亡率低于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);但实验组和对照组细胞晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。另外,25μmol/L6-OHDA分别对实验组和对照组细胞作用不同时间后,同样,实验组细胞早期凋亡率低于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05);该浓度6-OHDA作用不同时间后,实验组和对照组细胞晚期凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达PCBP1基因可抵抗6-OHDA对SH-SY5Y细胞的早期凋亡作用,降低细胞凋亡率。; 贾冰冰霍丽蓉; 关键词：6-OHDA 细胞凋亡

pLentiLox3.7完整慢病毒颗粒对HEK-293细胞的生物学影响: 2013年; 目的通过实验观察无外源基因的慢病毒颗粒对HEK-293细胞产生的生物学影响,为选择以何种方式获得重组慢病毒感染的目的细胞提供基础依据。方法以pLentiLox3.7慢病毒核心空载体和包装质粒VSVG、RSV-REV和pMDLg/pRRE按一定比例混合,采用脂质体共转染,将慢病毒载体系统的4质粒共转染HEK-293T细胞,收获病毒原液,再以浓缩的病毒原液或等体积的培养基加入培养中的HEK-293细胞,观察细胞的形态变化,分析其染色体并采用流式细胞术分析细胞周期。结果按照本实验中慢病毒包装的质粒比例及包装过程获得的浓缩病毒液使得HEK-293细胞具有融合趋势,染色体分析后表明细胞尚未真正融合,但流式分析显示一定量的慢病毒可使得S期的细胞比例显著增多。结论一定量的慢病毒对细胞具有融合趋势,建议取低浓度含有荧光筛选标签的重组慢病毒感染目的细胞,培养之后再进行流式无菌分选以获得较纯的目的细胞。; 邹林樾霍丽蓉; 关键词：慢病毒转染细胞融合细胞周期

PCBP1对6-OHDA作用的HA细胞生长状况的影响: 2019年; 目的探讨核不均一核糖核蛋白(PCBP1)基因对6-OHDA作用的人星形胶质细胞系HA细胞生长状态的影响。方法利用亚克隆方法构建pEGFP/N1-PCBP1重组质粒,经酶切以及DNA测序鉴定,脂质体转染HA细胞24h后,采用不同浓度6-OHDA刺激HA细胞72h。细胞计数及CCK8法绘制细胞生长曲线了解细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞生长状态。结果5、10μmol/L 6-OHDA作用下,转染PCBP1的HA细胞(实验组)较转染对照质粒的HA细胞(对照组)增殖加速(P<0.05);20、30μmol/L 6-OHDA作用下,实验组和对照组的细胞增殖情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外实验初步证明PCBP1对低浓度6-OHDA作用的HA细胞的生长有一定促进,对神经毒素有明显的抵抗作用。; 贾冰冰叶梦霍丽蓉; 关键词：星形胶质细胞基因转染细胞生长

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国家自然科学基金(31200811)