广东省自然科学基金(06300563)
- 作品数:4 被引量:11H指数:1
- 相关作者:王峰黄璐圆沙文琼郭钦丽许华更多>>
- 相关机构:暨南大学中国科学院广州生物医药与健康研究院更多>>
- 发文基金:广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- 人α-防御素基因的克隆及其在293T细胞中表达的临床意义被引量:1
- 2007年
- 目的克隆人α-防御素(α-HNP)基因,构建重组真核表达质粒pCG-HNP并检测其在293T细胞中的表达。方法提取人PBMC细胞的RNA,以其为模板用RT-PCR技术克隆人α-HNP的cDNA,并将其插入质粒pCG中构建真核表达载体。测序证实后,将重组质粒用脂质体法转染293T细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western)检测目的蛋白分子的表达。结果测序证实克隆的人α-HNP阅读框正确完整,PCR鉴定和酶切鉴定证实插入方向正确,免疫印迹结果显示重组质粒能够在293T细胞中表达HNP-GFP-Flag融合蛋白。结论α-HNP基因成功克隆;其在293T细胞中的表达可为进一步研究其抗HIV活性奠定基础。
- 王峰黄璐圆
- 关键词:防御素293T细胞真核表达
- 人血清白蛋白基因的序列特征分析
- 2006年
- 目的克隆人血清白蛋白(HSA)基因并对其序列进行分析。方法利用PCR方法从人胎肝cDNA中克隆HSA基因片段,用DNASIS(2.5)软件分析核苷酸及其推导的氨基酸序列,用SignalP3.0Server预测N末端氨基酸信号肽,用ClustalX(1.81)和GeneDoc对蛋白序列进行多重序列联配分析。结果成功克隆HSA基因,有15个外显子和14个内含子,与猴、猫、牛、兔和老鼠的蛋白氨基酸相似率分别为93%、82%、76%、75%、73%;含有3个保守的白蛋白结构域。结论本研究为开发长效蛋白药物奠定了良好的基础。
- 王峰黄璐圆
- 关键词:血清白蛋白基因
- 人转铁蛋白基因的克隆及序列分析被引量:9
- 2007年
- 目的:克隆人转铁蛋白基因并对其编码序列进行分析。方法:以人胎肝cDNA为模板,利用PCR方法克隆人转铁蛋白基因;通过与基因组序列对比分析基因组结构;通过TargetP 1.1和S ignalP 3.0预测信号肽;通过C lustal X(1.81)进行蛋白序列联配。结果:PCR扩增了一个长2 160 bp的基因片断,序列分析表明其覆盖了完整编码框,编码由698个氨基酸组成的人转铁蛋白。进一步分析发现人转铁蛋白基因有19个外显子和18个内含子,编码人转铁蛋白N端具有19个氨基酸组成的信号肽序列。人转铁蛋白与猩猩、猴子、兔子和老鼠的转铁蛋白氨基酸相似率分别为94%、91%、78%、73%。生物信息分析表明,人转铁蛋白含有高度保守的参与蛋白二硫键形成的半胱氨酸以及铁离子结合位点,有两个序列较同源的结构域。结论:成功克隆人转铁蛋白基因,人转铁蛋白与其它物种转铁蛋白同源。
- 王峰黄璐圆
- 关键词:转铁蛋白基因组结构
- vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴TCRVβ基因表达的影响被引量:1
- 2006年
- 目的检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)治疗的食蟹猴外周血T细胞TCRVβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变。方法11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其中14个TCRVβ亚家族T细胞的表达情况,运用基因扫描技术分析用药组与感染组差异表达的T细胞TCRVβ7亚家族基因中CDR3的长度了解其克隆性。结果与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个TCRVβ亚家族中表达(除去表达量极低的10个亚家族)相比较,感染后SIV组中部分样品Vβ7、8、14、16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中TCRVβ亚家族的表达量上升更加明显。基因扫描结果显示感染前、后标本中Vβ7亚家族的表达由多克隆向寡克隆变化的趋势。结论体内实验研究表明,SIV感染初期的食蟹猴体内部分TCRVβ亚家族有特异性的增生,且克隆性发生改变。vMIP-Ⅱ对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其促使特异性应答的免疫细胞的增生。
- 郭钦丽王峰沙文琼莫雪梅李秀英许华张光孙晗笑
- 关键词:TCRVΒRT-PCR基因扫描