国家自然科学基金(30970142)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 人副流感病毒3型HN糖蛋白受体结合位点突变分析
- 目的确定人副流感病毒3型(human parainfluenza type3virus,hPIV3)血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)受体结合位点的功能。方法采用定点突变与同源重组相结合的方法将HN基因的7个氨基酸突变为丙氨酸...
- 褚福禄温红玲王志玉
- 关键词：细胞融合
- 文献传递
- 人副流感病毒3型HN糖蛋白N-糖链的功能研究被引量：3
- 2013年
- 为了研究人副流感病毒3型(hPIV3)HN糖蛋白N-糖链的功能,采用基因定点突变技术构建糖基化位点突变体,然后检测各突变株的蛋白电泳速率、细胞表面表达量、受体结合活性、神经氨酸酶活性和促细胞融合活性。HN分子的G1、G2、G3和G4 4个糖基化位点分别和联合突变后发现G1、G2和G4及其联合突变株(G12、G14、G24和G124)电泳速率加快,而G3突变株电泳速率没有变化。各突变株的表达效率,神经氨酸酶活性与野毒株相比差别无统计学意义(P>0.05),但受体结合活性和促细胞融合活性均有不同程度的降低(P<0.05)。G1、G2和G4位点突变后受体结合活性分别为突变前的83.94%、76.45%和55.32%,而促细胞融合活性降为突变前的80.84%、77.83%和64.16%。联合突变株G12、G14、G24和G124血吸附活性进一步降低,为突变前的33.07%、20.67%、19.96%和15.11%,促细胞融合活性进一步降低为突变前的46.36%、12.04%、13.43%和4.05%。结果表明:hPIV3HN糖蛋白的糖链对HN糖蛋白的受体结合活性和促细胞融合活性有重要影响,推断糖链的丢失可能会引起HN糖蛋白头部结构(受体结合活性位点所在区域)或者方向的改变或者无法与宿主细胞膜表面的凝集素受体(一种与N-糖链结合的受体)结合,进而导致受体结合活性和促细胞融合活性的降低。
- 褚福禄温红玲侯桂华林彬张文强宋艳艳任桂杰孙成玺李振梅王志玉
- 关键词：细胞融合神经氨酸酶
- 新城疫病毒HN糖蛋白促细胞融合区域内保守氨基酸基因突变分析
- 2012年
- 目的确定新城疫病毒（NDV）血凝素神经氨酸酶（HN）糖蛋白促细胞融合区域内的保守氨基酸功能，探讨HN糖蛋白的促细胞融合机制。方法采用PCR定点突变与体内同源重组相结合的方法将HN糖蛋白促细胞融合区域内6个保守氨基酸突变为丙氨酸（A），在BHK21细胞内表达后，流式细胞仪定量分析蛋白的表达效率，并分别检测其促细胞融合活性、血细胞吸附能力（也称为受体识别活性）和神经氨酸酶活性。结果L74A蛋白表达效率降低为72．7％，各突变株蛋白表达效率与野毒株相比差别无统计学意义（P〈0．05）。各突变株蛋白促细胞融合活性都有不同程度的下降，其中1103A下降幅度最大，为野毒株的9．1％，各突变株蛋白血细胞吸附能力也都出现不同程度的降低，其中1103A的下降最明显，为28．2％，各突变株蛋白的神经氨酸酶活性变化程度不同，其中L74A略有升高，为118．6％，L110A下降幅度最大，为5．2％，1103A仅次于L110A，为5．7％。结论新城疫病毒HN糖蛋白促细胞融合区域内的保守氨基酸在细胞融合中发挥着重要作用，第103位异亮氨酸（Ⅰ）是此区域内的关键氨基酸。
- 褚福禄温红玲林彬孙成玺李振梅宋艳艳许洪芝王志玉
- 关键词：新城疫病毒细胞融合
- 人副流感病毒3型HN糖蛋白受体结合位点中保守氨基酸突变分析被引量：1
- 2016年
- 目的 研究人副流感病毒3型（hPIV3） HN受体结合位点中保守氨基酸功能.方法 采用定点突变与同源重组相结合方法将HN受体结合位点中的7个保守氨基酸突变为丙氨酸（A）,分别为R192A、D216A、E409A、R424A、R502A、Y530A和E549A,各突变株在BHK-21细胞内表达并测定其免疫沉淀反应、蛋白表达效率、促细胞融合、受体结合和神经氨酸酶活性.结果 各突变株在BHK-21细胞内折叠加工正常并成功转运到细胞膜,其膜表面蛋白表达率与野毒株相比差别无统计学意义;各突变株促细胞融合活性不同程度下降,R502A降低最多,为野毒株的14.2％;各突变株受体结合活性也不同程度降低,突变株吸附豚鼠红细胞与吸附人红细胞的能力大体一致;各突变株神经氨酸酶活性变化程度不同,R502A下降最多,为18.6％;E549A下降最少,为94.9％.结论 hPIV3HN蛋白受体结合位点中的保守氨基酸对HN的促细胞融合活性有重要作用,第502位精氨酸（R）是关键氨基酸.
- 褚福禄温红玲王志玉
- 关键词：细胞融合神经氨酸酶
