吉林省科委基金(200505127)
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- Lactacystin诱导PC12细胞胞内嗜酸性包涵体动态变化的研究
- 2009年
- 【摘要】目的研究蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导PCI2细胞胞浆内嗜酸性包涵体的动态变化过程。方法PCI2细胞中加入不同浓度lactacystin（0、5、10、20μmol／L），孵育24h后行HE染色及d—synuclein免疫组织化学染色，光镜观察包涵体变化；其中10μmol／Llactacystin组分别于加入lactacystin后24、36、48、72、96和120h行上述染色法，光镜观察包涵体变化。结果lacatacystin作用于PCI2细胞24h后，HE染色显示随着浓度增加，胞浆中嗜伊红包涵体数量逐渐增多。0μmol／L组胞浆中未看到包涵体，5μmol／L组胞浆中有少量包涵体出现（3.33％±1．15％1，10μmol／L组多数细胞胞浆出现典型球状包涵体（71．33％±4．16％1，20μmol／L组几乎每个细胞胞浆中均出现嗜伊红包涵体（90．33％±3．21％），个别包涵体游离于细胞外；10μmol／L组随着时间延长，包涵体逐渐从胞浆中游离至细胞外，其后胞浆逐渐缺失，在96h和120h时仅剩余胞核和球状包涵体。免疫组化染色显示：lactacystin作用24h时．胞浆中α-synuclein免疫反应阳性物质逐渐由散在颗粒逐渐聚集成球状包涵体：随着浓度的增加和时间延长，α-synuclein染色阳性的球状包涵体游走于细胞外，胞浆逐渐缺失，至96h和120h时仅剩余胞核和包涵体。结论lactacystin作用于PC12细胞后，早期在胞浆中出现散在的嗜酸性和α-synuclein免疫反应阳性的颗粒，随着浓度增加和时间延长，颗粒状物质在核旁聚集，最终形成固缩的包涵体，细胞外包涵体可独立存在。这种包涵体的动态变化过程与以人类帕金森病为代表的神经变性疾病中的包涵体非常相似．可以作为研究包涵体相关问题的有力工具。
- 张海娜胡馨予胡国华陈秋惠韩艳秋
- 关键词：蛋白酶体PCI2细胞包涵体
- Lactacystin诱导PC12细胞致帕金森病的实验研究
- 2008年
- 目的应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin构建帕金森病细胞模型,从泛素-蛋白酶体功能角度探讨帕金森病的发病机制。方法Lactacystin(0、5、10、15和20μmol/L)分别处理PC12细胞24h,MTT法检测细胞活力;HE染色观察包涵体生成;免疫组织化学法观察α-synuclein在胞内聚集情况;AO/EB双染及电镜检测细胞凋亡。结果10μmol/L Lactacystin作用24h后细胞活力开始显著低于对照组(P<0.01),随着浓度大,细胞活力进一步下降,呈浓度依赖性(P<0.01);HE染色显示胞浆核周出现圆形或椭圆形嗜伊红的包涵体;免疫组化显示包涵体α-synuclein染色呈强阳性;10μmol/L Lactacystin作用细胞24h后AO/EB双染提示细胞早期凋亡;电镜显示细胞核变小偏位,部分胞核固缩、趋边、凝聚。结论Lactacystin对多巴胺能神经元有毒性作用,可形成胞浆内包涵体并诱导细胞凋亡。蛋白酶体功能异常可能在帕金森病发病机制中发挥重要作用。
- 张海娜胡国华陈秋惠韩艳秋张颖孙亚娟张医芝
- 关键词：LACTACYSTINPC12细胞Α-SYNUCLEIN细胞凋亡帕金森病
- 蛋白酶体抑制剂制备帕金森病模型的研究进展被引量：1
- 2008年
- 张海娜陈秋惠韩艳秋胡国华
- 关键词：帕金森病蛋白酶体抑制剂细胞模型动物模型
- 乳胞素诱导大鼠致帕金森病的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的应用蛋白酶体抑制剂乳胞素(lactacystin)构建帕金森病(PD)模型,从泛素-蛋白酶体功能角度探讨PD的发病机制。方法应用立体定向注射法在大鼠黑质致密部上方注射乳胞素;观察大鼠行为学改变及光镜下中脑组织学改变;免疫组化染色观察黑质细胞α-synuclein表达和酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数。结果注射乳胞素后大鼠逐渐出现运动迟缓、少动、震颤等行为学异常,阿朴吗啡诱导出向健侧旋转行为;3 w后黑质部TH阳性细胞减少,部分黑质细胞内出现α-synuclein免疫反应呈强阳性的Lewy小体。结论乳胞素对多巴胺能神经元有毒性作用,可导致蛋白聚集、包涵体形成,应用乳胞素可成功构建PD模型;蛋白酶体功能异常可能在PD的发病中发挥重要作用。
- 张海娜胡国华陈秋惠韩艳秋张颖孙亚娟张医芝
- 关键词：帕金森病蛋白酶体
