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基因免疫制备西尼罗病毒NS5蛋白特异性单抗被引量：1: 2009年; 研究了NS5蛋白在西尼罗病毒的特异性检测方面的应用及NS5在黄病毒复制中的作用机理。采用RT-PCR方法扩增了西尼罗病毒株的NS5基因片段,将其克隆至真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒。以重组质粒免疫BALB/c小鼠后取脾脏进行杂交瘤细胞融合,建立能稳定分泌西尼罗NS5单克隆抗体的杂交瘤细胞株。构建了真核表达质粒pVAX1-WNV-NS5,免疫动物后获得了2B2B9等4株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,均为IgM型。真核表达质粒免疫后成功地诱导了针对NS5蛋白的体液免疫应答,单抗特异性分析显示4株单抗与其他黄病毒存在一定交叉反应。; 夏玉坤刘伯华李靖罗渊张永国杨保安祝庆余; 关键词：西尼罗病毒 NS5 基因免疫单克隆抗体

狂犬病实验室诊断研究进展被引量：3: 2008年; 狂犬病是世界上最可怕的人兽共患传染病,所有温血动物对狂犬病均易感,狂犬病已成为世界严重的公共卫生问题。暴露后疫苗接种可以达到有效的预防,狂犬病的预防和暴露后处理措施的有效实施均有赖于实验室的安全、准确、快速诊断。另外,免疫后及时对血清中和抗体效价进行监测,也是防控狂犬病的关键措施。文章从狂犬病实验室诊断的安全问题、实验室检测样本的选择、组织学检查、病毒抗原检测、生物学鉴定、核酸检测及血清抗体检测等方面对狂犬病实验室诊断方法及研究进展等进行综述和评价。; 高明华张志琰沈为明韩启茂; 关键词：狂犬病抗原核酸血清学

西尼罗病毒多表位基因的融合表达及其免疫保护作用研究被引量：1: 2007年; 目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达载体pET-43a-M，进行融合表达和纯化。将表达蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠并进行攻毒试验，观察其保护作用。结果分子克隆和构建了原核重组表达质粒pET-43a-M，表达和纯化了融合蛋白Nus-M，该蛋白免疫后的小鼠能够部分抵御西尼罗病毒的攻击。结论构建的西尼罗病毒多表位基因能够在原核细胞内表达，表达产物有较弱的免疫保护反应，为该病毒多表位抗原的串联及多表位疫苗研究提供了试验资料，但需要进一步改进。; 刘志国朱晓光杨保安刘伯华祝庆余; 关键词：西尼罗病毒多表位基因免疫保护

反向遗传学技术及其在狂犬病病毒研究中的应用被引量：2: 2008年; 反向遗传技术是一种新兴的分子生物学技术,已广泛应用于生命科学研究的各个领域。本文综述反向遗传学技术研究进展,并讨论该技术在狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)研究中的应用。; 郑学星夏咸柱杨松涛王化磊孙培录; 关键词：反向遗传学全长CDNA 狂犬病病毒

狂犬病病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用被引量：6: 2008年; 目的建立狂犬病病毒快速检测法。方法根据狂犬病病毒核蛋白基因的保守序列分别设计两对引物及其相应的TaqMan探针。构建pMD-N重组质粒,建立荧光定量RT-PCR绝对定量标准品,并对反应体系进行优化,建立绝对定量的标准曲线。利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并与普通RT-PCR法进行比较;作重复性和特异性检验后进行临床标本的检测。结果构建了绝对定量的参照质粒,标准曲线相关系数为0.998。狂犬病病毒荧光定量RT-PCR检测反应的灵敏度为10个TCID_(50);5种非狂犬病病原体检测均为阴性。结论建立的狂犬病病毒的荧光定量RT- PCR检测方法快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好,可以应用于临床样品的检测。; 郑学星杨松涛侯小强王化磊孙培录刘林立夏咸柱; 关键词：狂犬病病毒

抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：6: 2007年; 将狂犬病病毒ERA株纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为C7、C4和H3。经过鉴定:其腹水效价分别为1∶1×105、1∶5×104及1∶1×104;且与犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)不发生交叉反应;3株单抗均为IgG类型。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化,将纯化后的单抗腹水用FITC(异硫氰酸荧光素)标记制备荧光抗体,建立了检测狂犬病病毒的荧光染色法。结果表明,该方法对狂犬病的实验室诊断具有快速和特异性高的特点。; 薛琳夏咸柱高明华高玉伟侯小强; 关键词：单克隆抗体免疫荧光

表达狂犬病毒糖蛋白抗原的重组犬2型腺病毒的构建及鉴定被引量：8: 2007年; 为研制一种预防犬科动物狂犬病的新型疫苗,将含有狂犬病毒ERA株糖蛋白基因(Rabies glycoprotein,Rgp)表达盒的穿梭质粒pVAXΔE3Rgp中的Rgp表达盒克隆入犬2型腺病毒(Canine adenovirus type2,CAV2)骨架质粒pPoly2-CAV2中,获得重组质粒pPoly2-CAV2-ΔE3-Rgp,释放其基因组,转染MDCK细胞系,获得E3缺失区(Deletion of early protein3,ΔE3)含有Rgp表达盒的重组病毒CAV2-ΔE3-Rgp。该重组病毒能在MDCK细胞上产生典型的腺病毒细胞病变。通过酶切、PCR、基因测序,表明该重组病毒含有完整的Rgp表达盒。通过RT-PCR、Western blot等检测,表明该重组病毒能够表达Rgp抗原。用该重组病毒免疫犬,3次免疫后,可以诱导犬产生特异的抗CAV2HI抗体,其效价超过1∶256和抗狂犬病病毒(Rabies virus,RV)中和抗体,其效价超过0.50IU/mL。试验结果表明,获得的重组病毒免疫犬后,能够产生抗狂犬病毒和腺病毒的高效价保护性抗体,是一种有潜力的犬科动物狂犬病毒腺病毒二联疫苗候选株。; 赵忠鹏夏咸柱扈荣良谢之景闫芳黄耕杨松涛; 关键词：狂犬病毒犬2型腺病毒

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国家科技攻关计划(2004BA519A48)