国际科技合作与交流专项项目(2006DFA31450)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：司书毅彭宗根武燕彬蒋建东陈鸿珊更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用被引量：4
- 2011年
- 目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3-4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性。结果建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量。在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80,变异系数为1.91%。蛋白酶的Km值为4.74μmol/L,测得已知HCV蛋白酶抑制剂BILN 2061的Ki值为0.30 nmol/L。结论建立的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂FRET法筛选模型稳定可靠,适用于高通量筛选。
- 李健蕊武燕彬司书毅陈鸿珊蒋建东彭宗根
- 关键词：丙型肝炎病毒高通量筛选模型荧光共振能量转移
