国家自然科学基金(30740086)
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学更多>>
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- γ-干扰素对TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡影响的研究被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)对TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡作用的影响。方法:流式细胞术、蛋白质印迹法、蛋白质羰基测定法和共聚焦显微镜分别用于检测细胞凋亡、GAPDH蛋白表达、氧化损伤程度和细胞核内GAPDH免疫染色表达。运用微小RNA干扰技术下调GAP-DH表达。结果:与耐药细胞系相比,TRAIL敏感的FRO和KTC2细胞核提取液中可见不同程度的GAPDH蛋白表达、细胞内羰基蛋白显著集聚。IFN-γ可增加耐药ARO细胞核中GAPDH水平。IFN-γ或TRAIL单药组细胞凋亡率均<5%,而IFN-γ/TRAIL联合组细胞凋亡率达28.5%。siGAPDH组与siRNA对照组间细胞凋亡率差异有统计学意义(t=4.909,P=0.08),使对照组细胞凋亡率下降11%。结论:IFN-γ加强TRAIL诱导人甲状腺癌细胞凋亡可能是通过上调细胞核内GAP-DH表达实现的。
- 张海燕邓娓娓都镇先王华芹
- 关键词：甲状腺肿瘤细胞凋亡
- 蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的初步研究被引量：7
- 2010年
- 目的：探讨蛋白酶体抑制剂在诱导甲状腺未分化癌细胞系的凋亡作用中与核转录因子（NFκ-B）活性的关系。方法：利用蛋白酶体抑制剂PSI、EPOX和MG132作用7种甲状腺未分化癌细胞系,MTT法检测细胞生存率、乳酸脱氢酶（LDH）释放检测各组细胞LDH活性,利用酶联免疫吸附（ELISA）法定量分析NF-κBDNA结合活性,Caspases-3酶分析测定活性。结果：ARO和8305C细胞系对蛋白酶体抑制剂完全不敏感,FRO和KTC2细胞系IC50分别为PSI 4-6 nmol/L、EPOX 1-5 nmol/L和MG132 0.5-1μmol/L;KTC1和KTC3细胞系IC50分别为PSI 10-15 nmol/L、EPOX 10-20 nmol/L和MG132 1-2μmol/L;与对照组相比,所有细胞系应用PSI后,NFκ-B DNA结合活性减少,P〈0.05;应用EPOX时,NFκ-BDNA结合活性在FRO、KTC2、KTC3和8505细胞系中减少（P〈0.05）,但在ARO、KTC1和8305C细胞中保持不变（P〉0.05）。应用MG132处理后,NFκ-B DNA结合活性在所有细胞系中均无明显变化,P〉0.05;各组细胞系基础状态下Caspase-3活性差异无统计学意义,P〉0.05,作用后ARO和8305C细胞系Caspase-3活性最低,FRO和KTC2细胞系Caspase-3活性最高,是基础状态的10-12倍。KTC1和KTC3细胞系Caspase-3活性中等,是基础状态的6-7倍。结论：蛋白酶体抑制剂除通过抑制NFκ-B活性以影响甲状腺癌细胞生存之外,尚可能存在其他抗肿瘤细胞生存途径。
- 都镇先刘宝琴张海燕邓娓娓王华芹
- 关键词：甲状腺肿瘤蛋白酶体抑制剂NF-ΚB细胞凋亡
- siGAPDH对TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡抑制作用的研究
- 2009年
- 目的:探讨3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAP-DH)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)促人甲状腺癌细胞凋亡中的作用机制。方法:利用微小干扰RNA(siRNA)技术,设计沉默GAPDH基因表达序列,分别按经N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)预处理前、后(si-GAPDH、siGAPDH+L-NAME)组及siRNA对照进行分组,并设空白对照组同步进行甲状腺未分化癌细胞系(FRO)转染实验。蛋白质印迹法检测细胞中GAPDH蛋白表达,台盼蓝法检测细胞生存率,DNA裂解分析检测细胞凋亡,Caspases-3酶分析测定活性,一氧化氮(NO)产物测定法检测各组细胞亚硝酸盐和硝酸盐水平。结果:siGAPDH下调FRO细胞中GAPDH蛋白表达,细胞核中GAPDH几乎完全被封闭;与siRNA对照组细胞生存率(37%)相比,siGAP-DH组(60%)和siGAPDH+L-NAME组细胞生存率(67%)显著增加(χ2=4.88,P=0.027;χ2=7.98,P=0.026);Caspase-3活性显著下降(t=9.59,P=0.001;t=11.86,P=0.000),但两组间差异无统计学意义,t=1.65,P=0.172;siGAP-DH组和siRNA对照组NO产物较siGAPDH+L-NAME组显著增加(t=36.95,P=0.000;t=52.1,P=0.000),但两组间差异无统计学意义,t=2.563,P=0.062。结论:GAPDH作为NO产物作用的下游因子参与TRAIL促人甲状腺癌细胞凋亡作用。
- 方长清石俊英张海燕邓娓娓王华芹李建华
- 关键词：甲状腺肿瘤细胞凋亡
- TRAIL促人甲状腺癌细胞凋亡中一氧化氮作用的探讨被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨一氧化氮(NO)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人甲状腺癌细胞凋亡中的作用。方法:S-亚硝基化生物素转化法、一氧化氮合酶(NOS)活性及NO产物测定法检测各组细胞3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)S-亚硝基化与NO产物关系;蛋白质印迹法检测各组细胞及细胞核中GAPDH蛋白表达;台盼蓝染色、DNA裂解分析、Caspase-3活性测定法检测各组FRO细胞凋亡。结果:20ng/mLTRAIL处理FRO细胞0～24h,可见NOS活性及作为NO氧化产物的硝酸盐和亚硝酸盐水平呈时间依赖性增加,于4h开始显著增高,P=0.008;12h达高峰。iNOS抑制剂L-NAME抑制TRAIL诱导的GAPDHS-亚硝基化及其随后的细胞核转位,但不影响TRAIL诱导的GAPDH表达。L-NAME显著抑制TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡和Caspase-3活性,P值均<0.001。结论:NO介导的GAPDHS-亚硝基化修饰和随后的细胞核转位可能参与了TRAIL诱导的人甲状腺癌细胞凋亡。
- 邓娓娓周志可张海燕都镇先王华芹
- 关键词：甲状腺肿瘤一氧化氮细胞凋亡
- 衣霉素联合TRAIL促甲状腺癌细胞凋亡机制的研究被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合衣霉素促甲状腺未分化癌细胞系凋亡的作用机制。方法:通过TRAIL单用或联合衣霉素对多种甲状腺未分化癌细胞系进行作用,并以正常甲状腺上皮细胞系HTori-3作对照,采用蛋白印迹杂交法检测衣霉素处理前后各组细胞TRAIL死亡受体,诱杀受体和凋亡相关分子的蛋白表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡状态。结果:与对照组相比,衣霉素作用后,肿瘤细胞死亡受体DR4、DR5和诱杀受体DcR1、DcR2表达无明显变化(P>0.05),而存活素水平明显降低,P<0.05。TRAIL与衣霉素单用对甲状腺癌细胞均无明显杀伤作用,最高凋亡细胞比率分别为10.68%和10.14%;衣霉素与TRAIL联合组凋亡细胞比率最大达60.5%;但在存活素过表达甲状腺未分化癌ARO细胞中,凋亡细胞比率降低50%左右。结论:在体外单用TRAIL对甲状腺癌细胞增殖无明显抑制作用,衣霉素明显增加肿瘤细胞对TRAIL敏感性,其增敏机制至少部分与下调存活素水平有关。
- 都镇先张海燕邓娓娓王华芹
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体衣霉素甲状腺肿瘤存活素
- 3-磷酸甘油醛脱氢酶在TRAIL诱导甲状腺癌细胞凋亡中的作用被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phophoate de-hydrogenase,GAPDH)是否参与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosis factor related apoptosis indu-cing ligand,TRAIL)诱导的甲状腺癌细胞凋亡。方法:光学显微镜、流式细胞仪、实时荧光定量RT-PCR、蛋白质印迹法、台盼蓝染色和共聚焦显微镜分别用于检测细胞生存状态、凋亡、GAPDH mRNA与蛋白表达、细胞活性和核内GAPDH免疫染色表达。结果:对照组和2 ng/mL TRAIL处理组细胞生长状态良好,而其他处理组较差。TRAIL诱导凋亡和GAPDHmRNA均呈剂量依赖性。20 ng/mLTRAIL处理的FRO细胞中,GAPDHmRNA显著增加始于2 h,8 h达平台;GAPDH蛋白核转移始于2 h,8和12 h更为显著;2 h时无细胞死亡;GAPDH核染阳性细胞显著增加始于4 h,12 h时可占大部分。结论:GAP-DH可能介入了TRAIL诱导的细胞凋亡。
- 张海燕邓娓娓都镇先刘国良王华芹
- 关键词：甲状腺肿瘤肿瘤坏死因子类细胞凋亡
