国家科技攻关计划(2004BA519A55)
- 作品数：11 被引量：56H指数：5
- 相关作者：辛晓光乔传玲杨焕良陈艳陈化兰更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所辽宁省动物疫病预防控制中心新疆农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划珠海市软科学研究计划项目国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 中国部分地区猪流感病毒的遗传演化研究
- 猪的呼吸道上皮细胞具有禽流感病毒和人流感病毒受体,具有感染禽流感和人流感病毒的能力,被认为是新型流感病毒产生的"混合器"和古老流感病毒长期在猪体内存在的"贮存器"。近年来,为了更好防控猪流感,我们开展了中国部分地区的猪流...
- 于海周艳君李国新闫丽萍陈宗艳童光志
- 文献传递
- H3N2亚型猪流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA诊断方法的建立被引量：9
- 2008年
- 以pMD18-HA质粒为模板,PCR扩增HA1基因片段并与pET30a连接后,转化宿主菌BL21(DE3),IPTG诱导表达HA1蛋白,对表达蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting检测。结果表明,表达的重组HA1蛋白具有良好的反应原性,分子量约为45 ku。表达产物经过纯化作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感抗体的间接ELISA方法。该方法具有较高的特异性和敏感性,重复性良好,通过检测40份血清,与HI检测结果相比较,其符合率达86.5%。该方法为检测H3亚型猪流感抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。
- 丁选亚乔传玲陈艳杨焕良辛晓光韩庆功陈化兰
- 关键词：猪流感病毒间接ELISA
- 猪流感病毒血凝素基因原核表达及其在间接ELISA中的初步应用被引量：6
- 2008年
- 利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)血凝素(HA)基因,克隆于pMD18-T载体进行测序。以pMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克隆到表达载体pET32a中,经双酶切、测序及PCR鉴定得到阳性重组表达质粒pET-HA,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,HA蛋白获得了高效表达,经Western-blot检测证实表达产物具有良好的免疫学活性,在间接ELISA中的初步应用表明具有良好的抗原反应性。本研究为以重组HA蛋白为抗原建立H1亚型猪流感抗体的ELISA检测方法奠定了基础。
- 陈艳乔传玲丁选亚杨焕良辛晓光韩庆功陈化兰
- 关键词：猪流感病毒HA基因原核表达
- 猪源H9N2亚型流感病毒HA基因的序列测定及真核表达被引量：1
- 2007年
- 利用RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Zhejiang/7/2004(H9N2)(SW/ZhJ7/04)HA基因,测序后将其克隆到真核表达载体pCAGGS上,经酶切分析、PCR鉴定和测序验证,得到重组表达质粒pCAGGS-HA,之后将其转染293T细胞,48h后收集转染细胞样品,进行SDS-PAGE分析,结果显示HA蛋白获得了表达。经Western blot检测,结果表明pCAGGS-HA能够在体外瞬时表达具有免疫学活性的HA蛋白,通过免疫小鼠,对其免疫效果进行了初步研究。
- 韩庆功乔传玲杨焕良陈艳辛晓光丁选亚陈化兰
- 关键词：猪流感病毒HA基因真核表达
- 表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其免疫原性被引量：5
- 2009年
- RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基因PCR检测及序列测定,结果表明:HA基因已经正确地插入到腺病毒的基因组中;通过RT-PCR检测与Western blot分析,结果表明:HA基因能够进行正确转录,并且所表达的蛋白具有相应的生物学活性。子代重组腺病毒rAd-H5 HA-EGFP经增殖、纯化后感染性滴度可达2.26×1010TCID50mL-1。rAd-H5 HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能够诱导特异性的HI抗体产生,有效阻止病毒在体内的复制。
- 吴运谱乔传玲杨焕良陈艳展小过辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感病毒H5N1亚型HA基因重组腺病毒
- H9N2亚型猪流感病毒A/Swine/Shandong/1/02分离株的基因序列分析被引量：3
- 2007年
- 从有肺炎症状的病猪中分离到1株H9N2亚型猪流感病毒（SIV）A／Swine／Shandong／1／02，对其进行了全病毒基因序列分析。结果表明，该毒株8个基因片段的核苷酸序列均来自禽流感病毒（AIV），与我国目前家禽中流行的H9N2亚型AIV毒株具有很高的同源性，与A／Duck／Hong Kong／Y280／97（H9N2）的同源性为94．1％～98．9％，与A／Chicken／Beijing／1／94（H9N2）的同源性为94．5％～98．2％；推导的其血凝素（HA）裂解位点处的氨基酸序列为P—A-R—S-S-R，完全符合H9亚型AIV欧亚分支中的类A／Chicken／Beijing／1／94亚分支的特征；基因分析结果表明，该分离株的所有基因片段均来源于H9N2亚型AIV，它可直接感染猪，并导致发病，但它并未在猪体内发生重组。
- 杨焕良乔传玲陈艳辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感病毒H9N2
- 猪流感病毒HA基因原核表达及其初步应用
- 利用RT-PCR方法扩增猪流感病毒A/Swine/Henan/11/2005(H1N1)HA基因,克隆于PMD18-T载体进行测序。以PMD18-HA为模板、利用带酶切位点的引物再次扩增HA基因的开放阅读框(ORF),克...
- 陈艳乔传玲丁选亚杨焕良辛晓光韩庆功陈化兰
- 关键词：猪流感病毒HA基因原核表达
- 文献传递
- 猪流感(H1N1亚型)灭活疫苗的研究
- 将一株H1N1亚型的猪流感病毒(SIV)接种鸡胚,收获尿囊液,经甲醛灭活,以氢氧化铝为佐剂制成灭活疫苗。疫苗接种4～6周龄猪后,注射疫苗后均无不良反应。疫苗一次免疫后28d用同亚型病毒108.0EID50剂量攻毒,保护率...
- 杨焕良乔传玲李海燕陈艳辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感H1N1亚型灭活疫苗免疫
- 文献传递
- 猪流感病毒NP基因重组复制缺陷型腺病毒的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆至质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western blotting鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物学活性。重组腺病毒rAd-NP-EGFP经增殖、纯化后其TCID50可达1.26×1010/mL,为进一步研究该重组病毒的免疫原性奠定了基础。
- 展小过乔传玲陈艳杨焕良孔维吴运谱辛晓光陈化兰
- 关键词：猪流感病毒NP基因重组腺病毒
- 重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP对小鼠免疫保护性的研究
- 2011年
- 将重组腺病毒rAd-H5HA-EGFP以不同免疫剂量接种BALB/c小鼠,通过检测小鼠免疫后的抗体以及抵抗H5N1亚型流感病毒攻击的保护对rAd-H5HA-EGFP的免疫保护性进行了评估。分别以108 TCID50、107 TCID50的rAd5-H5HA-EGFP免疫小鼠,初次免疫后3周进行加强,剂量为2×108 TCID50和2×107 TCID50,同时以接种rAd5-EGFP和PBS的小鼠作为对照。二免后3周,将各组试验小鼠随机分为2组,分别应用106 EID50的SW/FJ/1/01株和CK/HuN/77/05两株H5N1亚型流感病毒进行攻击。结果显示,重组病毒108 TCID50和107 TCID50的免疫剂量均能够诱导高水平的HI抗体生成,rAd-H5HA-EGFP免疫小鼠在受到病毒SW/FJ/1/01和CK/HuN/77/05攻击后,与接种腺病毒rAd-EGFP和PBS的对照组小鼠相比,没有出现明显的体质量减轻,攻毒后病毒在免疫小鼠体内的复制被完全或部分抑制,脏器内检测到的病毒含量明显低于对照组小鼠;免疫小鼠在受到CK/HuN/77/05毒株攻击时,没有出现死亡(0/5),而接种rAd-EGFP和PBS的对照组小鼠均有死亡,死亡比例分别为4/5和5/5。以上结果表明,该重组rAd-H5HA-EGFP对小鼠具有良好的免疫保护性,有望成为1株新型H5N1亚型动物流感疫苗的候选重组毒株。
- 吴运谱乔传玲杨焕良展小过陈艳辛晓光陈化兰
- 关键词：重组腺病毒流感病毒H5N1亚型免疫保护性
