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牙龈卟啉单胞菌W83牙龈蛋白酶的提取、鉴定及对人成骨细胞增殖、凋亡的影响被引量：3: 2013年; 目的研究提纯并鉴定牙龈卟啉单胞菌(P.g)W83牙龈蛋白酶的方法,探讨牙龈蛋白酶对人成骨细胞系hFOB增殖及凋亡的影响。方法丙酮沉淀P.gW83上清,经重悬、透析、超滤提取牙龈蛋白酶;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分离牙龈蛋白酶条带;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱/源后衰变法(MALDI-TOF-MS/MS+MS)鉴定牙龈蛋白酶提取物;底物发色法测定牙龈蛋白酶活性;牙龈蛋白酶与人成骨细胞系hFOB1.19共培养,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)或CCK-8检测细胞凋亡或增殖。结果 P.gW83牙龈蛋白酶提取物经SDS-PAGE分离出50kDa蛋白条带,MALDI-TOF-MS/MS+MS鉴定其为精氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Rgps)。底物发色法测定Rgps、赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Kgp)活性分别为75.62、10.51U/L,5mmol/L半胱氨酸蛋白酶抑制剂TLCK对Rgps、Kgp活性抑制分别为99.51%、99.00%(P<0.01)。牙龈蛋白酶(Rgps活性15.12U/L、Kgp活性2.10U/L)与hFOB共培养8h可诱导细胞发生凋亡,出现典型的细胞核染色质凝聚,且随时间增加hFOB凋亡率逐渐上升,16～24h达到高峰。CCK-8法检测显示,牙龈蛋白酶呈时间依赖性抑制hFOB增殖。结论丙酮沉淀P.gW83上清,经重悬、透析、超滤提纯的牙龈蛋白酶主要成分是Rgps;底物发色法测定Rgps/Kgp活性,方法稳定、可靠;牙龈蛋白酶抑制hFOB增殖且促进凋亡。; 宋祥晨张福萍李希庭梁敏; 关键词：牙龈卟啉单胞菌成骨细胞

整合素β1介导牙龈蛋白酶所致的小鼠成骨细胞周期阻滞: 2018年; 目的探讨整合素β1(Itgb1)在介导牙龈蛋白酶所致的小鼠成骨细胞周期阻滞中的作用。方法 8.348 U/L牙龈蛋白酶处理MC3T3-E1细胞12、24、36、48、60、72 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性,含核糖核酸的碘化丙啶(PI/Rnase)染色检测细胞周期G0/G1、S、G2/M各期分布。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测cyclin D1和CDK4蛋白表达水平。携带Itgb1基因的慢病毒转染MC3T3-E1细胞,构建Itgb1过表达稳转细胞株。所有数据采用SPSS 22.0统计软件包进行统计学分析。结果 CCK-8结果显示,8.348 U/L牙龈蛋白酶处理成骨细胞12~72 h持续抑制细胞增殖。流式检测结果发现,牙龈蛋白酶作用细胞12 h,停滞在G0/G1期的细胞比例由对照组(62.0±2.0)%升至(88.2±2.3)%,差异有统计学意义(F=35.218,P<0.001),S期细胞比例由对照组(36.8±6.2)%降至(5.9±2.3)%,差异有统计学意义(F=33.980,P<0.001)。Western blot结果表明,cyclin D1和CDK4的蛋白表达水平与对照组相比分别下调了65.0%(Fcyclin D1=60.294,Pcyclin D1<0.001)和40.3%(FCDK4=19.212,PCDK4=0.002)。同时牙龈蛋白酶降低Itgb1表达,过表达Itgb1部分逆转牙龈蛋白酶所致的细胞周期阻滞,S期细胞比例由牙龈蛋白酶处理空载体组的(5.8±1.1)%恢复至(14.4±3.1)%,差异有统计学意义(F=39.226,P=0.017),cyclin D1和CDK4蛋白下调水平亦得到部分逆转(Fcyclin D1=61.740,Pcyclin D1=0.033;FCDK4=41.635,PCDK4=0.014)。结论 Itgb1介导牙龈蛋白酶所致的小鼠成骨细胞细胞周期阻滞。; 徐娜吴娟邱绮虹张福萍梁敏; 关键词：整合素Β1 细胞周期成骨细胞慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌

人CD146+牙周膜干细胞的分选及其干细胞特性的鉴定被引量：3: 2013年; 目的:通过酶消化法及流式细胞分选技术分选CD146+牙周膜干细胞(Periodontal ligament cells,PDLCs),探讨其干细胞特性。方法:采用流式细胞技术从人牙周膜细胞中分选CD146+PDLCs,并对其进行免疫组化染色(角蛋白、波形丝蛋白及Stro-1),成骨、成脂诱导分化及克隆形成实验鉴定其干细胞特性。结果:CD146+PDLCs表达波形丝蛋白及Stro-1,具有成骨及成脂分化能力,体外培养能形成细胞克隆。结论:以CD146为分选指标的流式细胞分选技术可作为牙周膜干细胞筛选的方法。; 朱文俊谭媛元梁敏; 关键词：牙周膜细胞 CD146 成骨分化成脂分化

牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1表达的影响被引量：3: 2013年; 目的探讨牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡过程中对整合素α5、β1的调节机制，为牙周炎发病机制的研究提供理论依据。方法标准厌氧环境下培养牙龈卟啉单胞菌W83，分离提纯牙龈蛋白酶。用8．348U／L牙龈蛋白酶处理小鼠成骨细胞MC3T3-E148h，末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法4’，6-二脒基．2一苯基吲哚[transferase—mediateddeoxyuridinetriphosphate—biotinnickendlabeling-（4-Amidinophenyl）-6-indolecarbamidinedihydrochloride，TUNEL—DAPI]双染色法检测细胞凋亡；蛋白质印迹法检测整合素α5、β1蛋白的表达水平。结果精氨酸．蛋白酶活性为（41．74±2．11）U／L，赖氨酸一蛋白酶活性为（1．02±0．25）U／L。TUNEL—DAPI染色显示牙龈蛋白酶作用于MC3T3一E1细胞48h后诱导细胞发生凋亡。在短时间内（≤72h）牙龈蛋白酶呈时间依赖性下调整合素α5、β1的表达水平，48h时整合素α5、β1相对表达量分别为（0．485±0．039）、（0．504±0．002），72h时分别为（0．398±0．058）、（0．179±0．001），与对照组（蛋白相对表达量分别为1．000±0．000、1．000±0．000）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）；72h后，整合素α5表达水平与对照组相比差异无统计学意义，但整合素B1仍持续下调（96、120h时相对表达量分别为0．604±0．003、0．357±0．002），均显著低于对照组（1．000±0．000）（P〈0．05）。牙龈蛋白酶特异性抑制剂甲苯磺酰．L．赖氨酰．氯甲基酮（tosyl．CL—clysine-chloromethyl—ketone，TLCK）可有效抑制蛋白酶活性，使整合素α5、β1蛋白表达量分别从（0．398士0．058）、（0．179±0．001）显著上升至（0．7814-0．012）、（0．857±0．060）（P〈0．05），但TLCK本身不改变整合素α5、β1的表达水平（P〉0．05）。同时牙龈蛋白酶还呈剂量依赖性下调整合索α5、β1的表达水平，20．8700U／L牙龈�; 张剑英付云宋祥晨梁敏; 关键词：细胞凋亡整合素Α5 整合素Β1

Bcl-2家族促凋亡蛋白Bim在骨改建中的作用及调节: 2014年; 骨改建是由骨吸收与骨形成精密控制的生理过程,其中破骨细胞、成骨细胞分别是骨吸收、骨形成的功能细胞。生理状态下成骨细胞形成新骨与破骨细胞吸收旧骨处于平衡稳定状态,病理状态下成骨细胞和(或)破骨细胞的凋亡异常影响骨改建。Bcl-2 interacting mediator of cell death(Bim)作为内在凋亡通路上Bcl-2家族促凋亡蛋白,在骨改建中发挥重要作用。该文就Bim在成骨细胞及破骨细胞凋亡过程中表达、调节及骨改建中的作用予以综述。; 宋祥晨梁敏; 关键词：BIM 成骨细胞破骨细胞骨改建

经典Wnt信号通路对细胞成骨分化的调控作用被引量：1: 2014年; Wnt信号通路是参与体内多种器官发育和组织新陈代谢的保守性通路,可分为经典和非经典Wnt信号通路.其中,经典Wnt信号通路通过调节下游的成骨相关转录因子调控细胞成骨分化、骨基质形成和矿化,且在细胞分化的不同阶段发挥不同的调控作用.此外,经典Wnt信号通路还调控牙周组织干细胞成骨分化,该作用受外界微环境的影响.加深对经典Wnt信号通路的认识有助于治疗相关的骨疾病.; 邱绮虹梁敏; 关键词：成骨分化牙周组织

高糖高脂抑制成骨细胞增殖及促进凋亡被引量：4: 2018年; 目的:探究高糖高脂对成骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:以完全培养基为对照组培养基,以含20.0mM葡萄糖(D-glucose)、0.4mM棕榈酸(Palmitic acid,PA)及0.5%牛血清白蛋白(Bovine ser um albumin,BSA)的完全培养基为实验组模拟高糖高脂环境,分别处理成骨细胞0-48h后,显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8检测细胞增殖活性,Annex in V/PI双染流式检测细胞凋亡率,Western blotting检测caspase-3及cleaved caspase-3蛋白水平。结果:成骨细胞在高糖高脂环境下培养24h时观察到细胞皱缩变圆,胞间间隙增宽;CCK-8检测提示高糖高脂培养成骨细胞24h时与同时刻对照组相比出现增殖抑制(F_(24h)=24.489,P=0.001),48h后增殖活性(0.027±0.022)较同时刻对照组差异有统计学意义(F_(48h)=272.440,P<0.001);Annex in V/PI双染流式检测显示,24h时高糖高脂组细胞凋亡率为9.68%±3.33%,36h时细胞凋亡率上升至12.89%±3.40%,可达对照组(1.96±1.32)约6.6倍;Western blotting检测发现健康成骨细胞极少表达cleaved caspase-3,高糖高脂可时间依赖性上调cleaved caspase-3蛋白水平,24h时cleaved caspase-3相对蛋白表达量(0.349±0.068)约为对照组(0.146±0.033)2.4倍,36h时(0.468±0.136)达对照组3.2倍(F=9.603,P=0.001)。结论:高糖高脂可时间依赖性抑制成骨细胞增殖,促进凋亡。; 吴娟邱绮虹杨骥锋梁敏; 关键词：高糖高脂成骨细胞细胞增殖细胞凋亡

牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中促凋亡蛋白Bad的表达改变被引量：4: 2013年; 目的:检测牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中Bad的表达改变,为保护成骨细胞提供依据。方法:8.348U/L牙龈蛋白酶处理成骨细胞0、4、8、16、24、48和72h,或将不同浓度牙龈蛋白酶与成骨细胞作用24h后,蛋白质印迹法检测Bad蛋白表达改变。结果:在一定范围内,牙龈蛋白酶在诱导成骨细胞凋亡中呈时间和剂量依赖性上调Bad的表达,牙龈蛋白酶抑制剂TLCK有效抑制牙龈蛋白酶所诱导的Bad的高表达。结论:牙龈蛋白酶上调Bad的表达,促凋亡蛋白Bad参与了牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡过程。; 张福萍宋祥晨陈玉婷梁敏; 关键词：成骨细胞细胞凋亡 BAD

促凋亡蛋白Bim、Bax和Bak在牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡中的表达被引量：10: 2013年; 目的建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型，检测成骨细胞凋亡过程中与Bc｜-2蛋白相互作用的细胞死亡调解子（Bcl-2 interacting mediator，Bim）、Bcl-2蛋白相关X蛋白（Bcl-2associated X protein，Bax）和Bcl-2蛋白拮抗剂（Bcl-2 antagonist／killer，Bak）的表达，探寻保护成骨细胞的方法，为牙周炎的发病机制研究提供依据。方法提取牙龈蛋白酶并测定其活性；将0．453、0．906、1．812U／L牙龈蛋白酶分别与成骨细胞共培养0、16、24和48h，4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（4’，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）染色及膜联蛋白V-碘化丙啶双染色检测牙龈蛋白酶诱导成骨细胞（小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14）凋亡，建立牙龈蛋白酶诱导成骨细胞凋亡模型；1．812U／L牙龈蛋白酶与成骨细胞共培养0、4、8、16、24和48h，蛋白质印迹法确定成骨细胞凋亡过程中Bim、Bax、Bak的蛋白表达；胰蛋白酶抑制剂抑制1．812U／L牙龈蛋白酶活性后与成骨细胞共培养24h，蛋白质印迹法检测Bim蛋白表达与成骨细胞凋亡率的改变。结果精氨酸-牙龈蛋白酶活性为（18．11±2．11）U／L，赖氨酸-牙龈蛋白酶活性为（1．02±0．25）U／L；DAPI染色显示1．812U／L牙龈蛋白酶可诱导成骨细胞凋亡，16h凋亡率为（6．31±0．37）％，24h达（11．20±0．35）％，48h为（10．80±0．46）％；膜联蛋白V-碘化丙啶染色结果与DAPI染色结果基本-致。成骨细胞凋亡过程伴随促凋亡蛋白Bim的表达升高，4h时Bim相对蛋白表达量为（0．31±0．03），约为对照组（0．17±0．03）的2倍，24h时Bim相对蛋白达峰值（0．57±0．05），为对照组的3～4倍；胰蛋白酶抑制剂可有效抑制牙龈蛋白酶活性，使Bim蛋白表达量由（0．58±0．04）降至（0．14±0．03）；同时DAPI染色显示胰蛋白酶抑制剂可逆转牙龈蛋白酶诱导的细胞凋亡，24h成骨细胞凋亡率由（11．20±0．35）�; 陈玉婷宋祥晨张福萍梁敏; 关键词：细胞凋亡胰蛋白酶抑制剂

BMP-2对牙周膜干细胞的增殖、分化、迁移的影响被引量：1: 2014年; BMP-2是一种可调节具有成骨特性细胞的生物学特性(形态发生、增殖分化、迁移趋化等)的生长因子。牙周膜干细胞是存在于牙周膜中的一种具有自我增殖、多向分化潜能的成体干细胞,被誉为牙周组织工程的最佳种子细胞。研究BMP-2对于牙周膜干细胞生物学特性的影响,对于联合二者应用于牙周组织再生有一定的临床意义。本文就BMP-2对牙周膜干细胞的增殖、分化和迁移特性的影响作一综述。; 黄子贤梁敏; 关键词：BMP-2 牙周膜干细胞细胞增殖细胞分化细胞迁移

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