江苏省自然科学基金(BK2006241)
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 相关作者：钱祝银苗毅高文涛彭泉蔡辉华更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院解放军第105医院中国人民解放军第105医院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢性胰腺纤维化研究的新热点被引量：3
- 2007年
- 实质纤维化是慢性胰腺炎的特征。静息型胰腺星状细胞受转化生长因子β（TGF-β）刺激后转化激活,导致细胞外基质大量生成并最终发展为纤维化。Smad能正性或者负性调节TGF-β信号传导,深入研究其机制有助于明确纤维化的成因,指导慢性胰腺炎的治疗。
- 杨桂元钱祝银
- 关键词：TGF-ΒSMAD胰腺星状细胞慢性胰腺炎纤维化信号传导
- 胰腺癌细胞系BxPC3及胰腺癌组织Ras相关区域家族1A启动子CpG岛的甲基化状态
- 2010年
- 目的 检测Ras相关区域家族1A（Ras association domain family 1A,RASSF1A）在胰腺癌细胞株BxPC3及胰腺癌组织中的甲基化状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病机制中的可能作用.方法 采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法（combined bisulfite restriction analysis,COBRA）检测胰腺癌细胞株BxPC3、5例正常胰腺组织、13对胰腺癌及相应癌旁正常胰腺组织中RASSF1A启动子CpG岛的甲基化状态,计算其甲基化率.以甲基化酶抑制剂5-Aza-dC（5-Aza-2-deoxycitydine）处理BxPC3,观察处理前后甲基化率变化情况及RASSF1A mRNA表达变化.结果 在BxPC3细胞株中,RASSF1A启动子的CpG岛甲基化率为62.90%;正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为9.14%、53.79%和55.82%.与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高（P值〈0.01）,而癌旁及癌组织之间无明显差异（P〉0.05）.BxPC3经5-Aza-dC处理后,RASSF1A的CpG岛甲基化率显著下降至42.50%（P〈0.05）,同时RASSF1A mRNA表达增强.结论 RASSF1A启动子CpG岛异常甲基化是胰腺癌发生发展中的早期事件,可能参与胰腺癌的发病过程.
- 彭泉蔡辉华高文涛钱祝银苗毅
- 关键词：甲基化CPG岛
- 胰腺癌细胞株PANC1异常甲基化miRNA的分析
- 2012年
- 目的分析胰腺癌细胞株PANC1与正常胰腺组织表达有差异的启动子区甲基化miRNA，寻找与胰腺癌相关的高甲基化miRNA。方法抽提PANC1与正常胰腺组织基因组DNA，超声断裂。应用抗5-甲基化嘧啶核苷抗体和免疫磁珠法获取甲基化DNA片段。通过DNA甲基化芯片筛选出PANC1与正常胰腺组织表达差异的高甲基化miRNA，采用重亚硫酸盐修饰的PCR（BSP）和TA克隆测序的方法进行验证。提取胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1、SW1990基因组DNA，采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法（combined bisulfite restriction analysis，COBRA）验证芯片筛选出的差异表达的甲基化miRNA。结果PANC1细胞与正常胰腺组织存在8个差异表达的甲基化miRNA，从中挑选出5个进行BSP＋TA克隆测序验证，其中miR-615、miR-663、miR-663b在PANC1细胞的甲基化率明显高于正常组织（60．6％比7．6％，88．8％比22．2％，94．4％比13．0％）；miR-675的甲基化率与正常胰腺组织无明显差异（76．0％比100％）；miR1826因测序结果误差较大而舍去。经COBRA验证，PANC1的上述4种miRNA均高甲基化；BxPC除miR-675外，其他3种均高甲基化；CFPACI的miR-663、miR-663b高甲基化；SW1990的miR-615、miR-663高甲基化。结论胰腺癌细胞株与正常胰腺组织间存在差异表达的高甲基化miRNA，其中miR-663高甲基化与胰腺癌可能相关。
- 彭泉张立洁蔡辉华高文涛赵成功钱祝银苗毅
- 关键词：胰腺肿瘤微RNASTA克隆
- 腹主动脉灌注法分离胰腺星状细胞及其培养、鉴定被引量：6
- 2007年
- 目的:通过腹主动脉插管灌注胶原酶分离胰腺星状细胞(pancreaticstellatecell,PSC),建立简单易行的PSC分离方法,并对PSC进行培养和鉴定。方法:大鼠腹主动脉插管灌注后,经胶原酶消化、Nycodenz密度梯度离心,分离得到PSC;通过观察细胞形态、胞质内脂滴和免疫细胞化学方法检测结蛋白(desmin)、神经胶质酸纤维蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)、α平滑肌肌动素(α-smoothmuscleactin,α-SMA)的表达来鉴定PSC。结果:腹主动脉灌注法分离得到PSC,产率、活力和纯度分别为(:15.3±4.6)×103/g体重(﹑95.0±3.5)%﹑﹥80%;培养24h后大多数细胞已贴壁,呈星状或多角形,48h后表达desmin、GFAP,并在96h后表达α-SMA。结论:通过腹主动脉灌注法较容易分离得到PSC,其产率、活力和纯度较高,经鉴定后能够满足体外实验要求。
- 周龙安杨桂元钱祝银
- 关键词：胰腺星状细胞
- DNA甲基化异常对mir-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中表达影响被引量：4
- 2011年
- 目的:描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对miRNA表达抑制所起的作用。观察DNA甲基转移酶抑制剂对miR-615-5p在胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化状态和表达的影响。方法:甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株PANC-1中存在异常甲基化的miRNA。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理体外培养的PANC-1细胞,甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)结合亚硫酸氢盐修饰结合测序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)检测用药前后miR-615-5p的甲基化状态的改变。采用RT-PCR定量检测用药前后miR-615-5p表达量的差异。结果:通过MSP和BSP发现在胰腺癌细胞株PANC-1中甲基化率明显高于正常组织。对胰腺癌细胞株用去甲基化剂5-aza-dC的作用,发现miR-615-5p甲基化率减少并伴随着表达的重新激活。结论:胰腺癌细胞株PANC-1中的miR-615-5p表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1中miR-615-5p的表达沉默。
- 朱墨高文涛钱祝银苗毅
- 关键词：DNA甲基化5-氮杂胞苷
- SOX7基因在胰腺癌细胞株的表达及其启动子区甲基化状态的研究被引量：7
- 2010年
- 目的:检测SOX7基因在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,初步探讨两者之间的关系。方法:采用RT-PCR检测SOX7基因在胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1、PANC-1和SW1990中的表达水平。重亚硫酸盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测启动子区域甲基化状态。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine,5-aza-dC)处理各细胞株后,检测SOX7基因的mRNA表达和甲基化状态变化。结果:在胰腺癌细胞株BXPC-3、CFPAC-1中SOX7基因的mRNA呈阳性表达,而在PANC-1和SW1990中SOX7基因表达沉默;与BXPC-3、CFPAC-1相比,PANC-1和SW1990中SOX7基因启动子区甲基化率较高。经过去甲基化处理后,PANC-1与SW1990中SOX7启动子区的甲基化率下降,基因重新表达。结论:胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990中的SOX7基因表达与启动子区甲基化状态有关,启动子区的高甲基化导致PANC-1、SW1990中SOX7基因的表达沉默。
- 彭泉蔡辉华高文涛钱祝银苗毅
- 关键词：DNA甲基化胰腺癌5-氮杂胞苷
- 胰腺癌细胞株HOXA7基因表达及其启动子区甲基化状态
- 2010年
- 目的 检测HOXA7 mRNA在胰腺癌细胞株中的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者的相关性.方法 采用RT-PCR法检测人胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1、PANC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA的表达水平.采用重亚硫酸盐测序PCR（bisulfite sequencing PCR,BSP）和结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法（combined bisulfite restriction analysis,COBRA）检测启动子区域甲基化状态.应用去甲基化药物5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-dC）处理各细胞株,检测处理前后细胞HOXA7 mRNA表达和甲基化状态的变化.结果 胰腺癌细胞株BxPC3、CFPAC1和SW1990细胞均表达HOXA7 mRNA,而PANC1细胞不表达HOXA7 mRNA.CFPAC1、BxPC3、PANC1和SW1990中HOXA7启动子甲基化率分别为93.16%、90.65%、90.09%、52.30%,SW1990细胞的HOXA7甲基化率较其他三株细胞均明显降低（P值均＜0.01）.经5-aza-dC处理后,PANC1细胞的HOXA7 mRNA重新表达,BxPC3的HOXA7 mRNA表达增强;而CFPAC1和SW1990细胞的HOXA7 mRNA在5-aza-dC处理前后无明显变化.结论 胰腺癌细胞株BxPC3和PANC1细胞的HOXA7mRNA表达与启动子区甲基化状态密切相关,而CFPAC 1和SW1990细胞两者无明显相关性.
- 彭泉蔡辉华高文涛钱祝银苗毅
- 关键词：胰腺肿瘤DNA甲基化5-氮杂胞苷
