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栽培草莓果实中特异表达的bHLH78基因的克隆及过量表达载体构建被引量：7: 2014年; 根据二倍体野生森林草莓(Fragaria vesca)预测的bHLH78-like基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术从八倍体栽培凤梨草莓(Fragaria×ananassa)品种‘幸香’果实中克隆出FabHLH78基因全长CDS。测序和分析结果表明,FabHLH78基因的CDS全长1 653 bp,编码550个氨基酸残基,在线软件Compute pI/Mw分析编码的蛋白质理论分子量约为59.6 kD、等电点(pI)6.17,经软件DNAMAN分析,核酸序列和氨基酸序列与二倍体草莓FvbHLH78-like基因的一致性分别为98.31%和96.55%。利用半定量PCR检测FabHLH78基因在草莓根、匍匐茎、叶、果实中的表达情况,发现其只在果实中特异表达;实时定量RT-PCR结果显示随着果实发育FabHLH78基因表达量逐渐增加。FabHLH78全长CDS被整合到植物表达载体pRI101-AN上,构建出FabHLH78基因的过量表达载体pRI101-bHLH78,为进一步验证FabHLH78基因的功能奠定了基础。; 豆玉娟曹飞马跃李贺刘月学张志宏; 关键词：草莓基因克隆实时定量PCR

葡萄COR27基因的克隆与抗寒功能研究被引量：6: 2015年; 冬季低温是制约我国葡萄和葡萄酒产业发展的主要因素之一,揭示葡萄在冷胁迫下的信号转导通路、挖掘抗寒相关基因并解析其功能,对高耐寒品种的培育具有重要的理论和应用价值。本研究在欧亚种‘玫瑰香’葡萄(Vitis vinifera L.‘Muscat Hamburg’)冷胁迫相关转录组分析的基础上,鉴定了一个抗寒候选基因,通过同源性分析将其命名为VvCOR27。VvCOR27基因的cDNA序列(1082 bp)中,其开放阅读框(ORF)为909 bp,编码302个氨基酸。同源性分析显示,13个物种的COR27蛋白均具有3个特有的保守结构域。定量RT-PCR分析表明,VvCOR27在4℃低温处理24 h后大量表达。基于基因组序列的启动子基序分析表明,VvCOR27启动子区均只含有1个EE、EEL、G-box、ABREL元件,其数量少于AtCOR27,这可能是VvCOR27响应冷胁迫较AtCOR27滞后的原因。对3个超表达VvCOR27转基因拟南芥株系的抗寒性鉴定表明,VvCOR27参与了植株对冷胁迫的应答并作为正调控因子增强了植株对冷胁迫的耐受能力。; 范高韬孙小明任小蝶李绍华辛海平王万军; 关键词：葡萄冷处理抗寒性转基因拟南芥

早熟丰产抗病草莓新品种——‘宁露’的选育被引量：8: 2013年; ‘宁露’是以‘幸香’为母本、‘章姬’为父本经杂交选育而成的设施草莓新品种,该品种极早熟,丰产,果实外观整齐漂亮,畸形果少。果实圆锥形,果面亮红色。肉质细,风味甜,南京地区全年平均可溶性固形物含量10.3%,硬度1.68 kg·cm-2。连续开花坐果性强,果大,平均单果质量17.7 g,株产357 g,产量37 500 kg·hm-2左右。早期产量占有率为40.88%。植株生长势强,半直立。抗热抗寒性强,育苗容易,冬季不易矮化。抗炭疽病、白粉病,适合我国大部分地区促成栽培。; 王壮伟赵密珍钱亚明于红梅蔡伟建夏瑾; 关键词：草莓早熟丰产抗病

中国野生山葡萄VaERD15基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：3: 2014年; 为探索中国野生山葡萄(Vitis amurensis)抗寒相关基因的抗寒作用机理,以中国野生山葡萄抗寒基因cDNA文库筛选的VaERD15基因(V.amurensis early responsive to dehydration 15)cDNA为模板,采用PCR扩增获得VaERD15基因的开放阅读框为423bp;通过构建pGEX-6p-1/VaERD15原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,经IPTG诱导表达出32.2kD的融合蛋白GST-VaERD15。该融合蛋白主要以包涵体表达形式存在,经0.1 mmol·L-1IPTG于37℃下诱导4h,其表达量最大;进一步用电透析法纯化融合蛋白,以纯化产物免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测结果表明其抗原-抗体免疫反应良好,获得的多克隆抗体能够用于VaERD15基因的功能分析。; 张剑侠翟焕牛茹萱李瑞民; 关键词：中国野生葡萄山葡萄原核表达多克隆抗体

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国家科技支撑计划(2013BAD02B04)