湖南省自然科学基金(07JJ3053)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：申良方曾珊申竤钟美佐朱虹更多>>
- 相关机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒E1A基因对人宫颈癌细胞体外增殖抑制的实验研究
- 2009年
- 目的:探讨聚已烯亚胺-四氧化三铁(PEI-Fe3O4)纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞体外增殖的抑制作用及其作用机制,为宫颈癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。方法:E1A基因经PEI-Fe3O4纳米粒载体介导转染人宫颈癌细胞(Hela细胞),用细胞计数法测绘生长曲线、计算倍增时间及软琼脂集落形成数目,观察E1A基因对该细胞系体外生长的影响。采用RT-PCR和Western印迹检测E1A基因在宫颈癌细胞中的表达及对HER-2/neu基因表达的影响。结果:转染E1A基因的人宫颈癌细胞系生长缓慢,倍增时间延长,是转染空载体组的1.53倍,是Hela细胞组的1.58倍;未经转染的Hela细胞系、转染空载体纳米粒的Hela细胞系(Hela-vect)及转染E1A基因的Hela细胞系(Hela-E1A),细胞集落形成率分别为30.48%,28.32%和6.62%,转染E1A基因组(Hela-vect)明显低于Hela和Hela-vect组(均P<0.05)。与Hela及Hela-vect组的集落形成率相比,Hela-E1A组集落形成抑制率分别为78.28%和76.62%。RT-PCR和Western印迹结果显示,E1A基因能在Hela细胞中稳定表达,且显著降低了HER-2/neu在宫颈癌细胞中的mRNA和蛋白表达水平。结论:PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因能够明显抑制人宫颈癌细胞的生长,其作用机制可能与E1A抑制HER-2/neu基因的表达有关。
- 欧阳红匡韦陆周琴贺理礼周略欧阳淑玉申良方
- 关键词：人宫颈癌细胞E1A基因HER-2/NEU基因
- 大鼠Smad1基因重组腺病毒的构建被引量：1
- 2008年
- 目的利用Cre-loxP特异性位点基因重组技术构建大鼠Smad1的重组腺病毒。方法巢式PCR得到大鼠Smad1全部开放阅读框架序列,克隆到质粒pCR-BluntⅡ-TOPO中,然后将目的基因片段连接到中间载体质粒pDNR-CMV,测序后在Cre重组酶作用下,将Smad1 cDNA转移到腺病毒载体pLP-Adeno-X-CMV。在HEK293细胞中包装和扩增重组腺病毒,并检测Smad1基因重组腺病毒在大鼠肝脏星状细胞系HSC-T6中的表达和功能。结果PCR法和限制性内切酶XholI消化法均证实Smad1重组腺病毒的成功构建,RT-PCR和Western Blot检测证实该重组腺病毒显著性增强了HSC-T6细胞中Smad1的mRNA、蛋白表达及其磷酸化水平。结论Cre-loxP特异性位点基因重组技术是一种快速、高效构建基因重组腺病毒的方法,大鼠Smad1基因重组腺病毒的成功构建为与Smad1有关的细胞信号调控以及基因治疗提供了良好的工具。
- 曾珊申良方钟美佐朱虹YuewenGong申竤
- 关键词：CRE-LOXP基因重组SMAD1腺病毒
