黑龙江省卫生厅科研项目(2005-38)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：邹朝霞周宏博刘莹莹张春晶房绍红更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学齐齐哈尔医学院哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省卫生厅科研项目黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 过表达Grx1抑制HEK293T细胞中H2O2诱导的p38MAPK信号通路被引量：3
- 2008年
- 谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)是细胞内一种重要的巯基-二硫键氧化还原酶,在细胞内氧化还原状态的调控及抵抗氧化应激损伤过程中发挥重要作用.为进一步探讨Grx1的抗氧化机制,本实验将重组质粒pcDNA3.1(+)-hGrx1瞬时转染HEK293T细胞,经RT-PCR和Western印迹验证,细胞转染后实现了Grx1的过表达;以不同浓度H2O2为损伤因素,建立细胞氧化应激模型,检测过表达Grx1后细胞存活率,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的变化,观察过表达Grx1后细胞的抗氧化能力;用终浓度100μmol/L H2O2作用于细胞,利用Western印迹检测120 min内HEK293T细胞中p38MAPK磷酸化水平.实验结果表明,HEK293T细胞过表达Grx1后,缓解了细胞的氧化应激损伤;转染空载体组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后5min开始升高,15min达到最高值,并可维持至120min左右;而过表达Grx1组细胞p38MAPK磷酸化水平在H2O2刺激后各时间段没有明显改变,提示Grx1通过抑制H2O2诱导的p38MAPK信号通路激活发挥其抗氧化作用.
- 邹朝霞李强刘莹莹吴莉芳张春晶房绍红周宏博
- 关键词：谷氧还蛋白P38MAPK瞬时转染
- 人谷氧还蛋白1基因克隆及真核表达载体的构建被引量：2
- 2006年
- 目的从ECV304细胞中克隆谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)的cDNA序列并构建真核表达载体pcD-NA3.1(+)-Grx1。方法利用Trizol一步法从ECV304细胞中提取总RNA,采用RT-PCR技术从中获得Grx1的cD-NA,将质粒pcDNA3.1(+)进行双酶切、CIP处理并回收纯化,与纯化后的Grx1cDNA连接构成重组表达载体pcD-NA3.1(+)-Grx1,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆鉴定并进行测序分析。结果经RT-PCR和测序鉴定,成功地克隆了人Grx1cDNA。结论从ECV304细胞中获得Grx1的cDNA,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-Grx1,对Grx1在体外表达、进一步研究其在氧化应激中的作用及其作用机制具有重要意义。
- 邹朝霞张春晶吴丽芳刘莹莹房绍红周宏博
- 关键词：基因克隆真核表达
