浙江省科技攻关计划(2006C33010)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：孙智慧郑良荣魏钟海邵蕾宋俊贤更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠降钙素基因相关肽基因重组腺病毒载体的构建及其在心肌细胞的表达
- 2010年
- 目的:利用AdEasy腺病毒载体系统,构建小鼠降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)基因重组腺病毒载体,并验证其在心肌细胞中的表达。方法:采用RT-PCR方法扩增出含有小鼠CGRP全长cDNA的基因片段,并将其插入PUC57载体,经EcoRⅤ和SalⅠ双酶切,将小鼠CGRP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV,形成重组质粒pShuttle-CMV-CGRP。经Pm eⅠ酶切线性化后,在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组产生重组腺病毒质粒AdEasy-pShuttle-CGRP。重组腺病毒质粒在XL-Gold细胞中扩增,经PacⅠ酶切线性化后,转染人胚肾293细胞进行重组腺病毒的包装,并经氯化铯纯化得到重组腺病毒AdEasy-pShuttle-CGRP。用纯化后的重组腺病毒转染原代培养的乳鼠心肌细胞,荧光显微镜下观察转染效果。通过尾静脉导入重组腺病毒7 d后,放免法测定心肌中CGRP的表达量。结果:测序证实PUC57-CGRP重组质粒中含有小鼠CGRP基因的cDNA;重组穿梭质粒pShuttle-CMV-CGRP经双酶切鉴定后可见约7.5 kb和423 bp片段;重组腺病毒质粒AdEasy-pShuttle-CGRP经PacⅠ酶切可见长约3kb与30 kb DNA片断。转染293细胞进行包装,7 d后细胞出现病变效应,回收病毒重复感染293细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。提取病变293细胞中重组腺病毒进行目的基因的PCR鉴定为阳性。构建好的重组腺病毒经纯化后具有很高的滴度,并且成功转染了原代培养的乳鼠心肌细胞。通过放免法证实,该载体可以显著增加小鼠心脏中CGRP的表达。结论:成功构建携带CGRP基因的重组腺病毒载体,该重组腺病毒载体AV-CGRP可以显著增加心脏中CGRP的表达量,为进一步研究CGRP基因治疗奠定了基础。
- 孙智慧韩杰邵蕾王利宏宋俊贤魏钟海郑良荣
- 关键词：降钙素基因相关肽基因疗法
- 瞬时受体电位通道与心律失常的关系被引量：2
- 2010年
- 瞬时受体电位通道(TRP)超家族组成超过50种阳离子通道,分布在几乎所有心血管组织中,可以整合多种物理和化学的刺激诱导Ca2+进入胞内。TRP通道家族对心脏节律的维持起着关键作用:TRPC可能通过钙池操纵Ca2+通道参与起搏调控;肥厚心肌中TRPM4表达上调,通过瞬时性内向电流(Iti)参与延迟后除极的发生;TR-PC1和TRPC6参与牵张诱发性心律失常的发生;在缺血缺氧的病理条件下,ATP/UTP的释放激活TRPC3/7引发心电异常。将来有望通过干预TRP活性来开发新一代的抗心律失常药物。
- 孙智慧郑良荣
- 关键词：心血管病学瞬时受体电位通道心律失常
- 辣椒素敏感感觉神经与血压调控的关系被引量：2
- 2009年
- 孙智慧郑良荣
- 关键词：高血压血压调控
- 基因治疗在心肌缺血再灌注损伤中的研究进展被引量：2
- 2009年
- 通过溶栓和经皮冠状动脉血管成形术达到再灌注是即将发生急性心肌梗死的标准处理措施。尽管缺血区的血流复灌对心肌的挽救具有重要意义,再灌注本身可能导致缺血损伤基础上的进一步心肌损伤。目前对心肌缺血再灌注损伤分子和细胞机制的更深理解以及心血管系统基因操作工具的利用,为基因治疗提供了可能性。为了提高人类血管基因治疗的有效性和安全性,对基因转导臷体,基因递送技术和有效治疗基因的鉴定等方面的基础研究是非常必要的。
- 孙智慧郑良荣
- 关键词：缺血再灌注损伤基因治疗心肌保护
