国家自然科学基金(30872136)
- 作品数:3 被引量:9H指数:2
- 相关作者:胡迎春吴德昌徐勤枝周平坤陈忠民更多>>
- 相关机构:军事医学科学院重庆医科大学中国人民解放军第二炮兵更多>>
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- 同源重组修复基因RAD51可提高PTEN缺失细胞基因组稳定性被引量:4
- 2011年
- 目的:研究同源重组修复基因RAD51对PTEN缺失小鼠胚胎成纤维细胞基因组稳定性的影响。方法:应用免疫荧光和中性单细胞电泳技术观察PTEN缺失后自发性和辐射诱导DNA双链断裂情况;并构建PTEN缺失细胞稳定转染RAD51的细胞系,γ射线照射后检测细胞存活率。结果:PTEN缺失导致细胞自发性和辐射诱导DNA双链断裂增多;转染RAD51后细胞存活率增高,辐射诱导的DNA双链断裂减少。结论:同源重组修复基因RAD51可以提高PTEN缺失细胞基因组稳定性。
- 陈忠民徐勤枝胡迎春霍艳英周平坤吴德昌
- 关键词:PTENRAD51基因组稳定性
- PTEN通过抑制PI3K-AKT信号通路上调Rad51基因的表达被引量:5
- 2011年
- 前期研究发现pten缺陷细胞的自发DNA双链断裂损伤水平显著增加.本研究探讨了抑癌基因pten对参与DNA同源重组修复的rad51基因表达的影响和机制.用实时定量PCR技术检测了PTEN野生型和缺陷型细胞rad51的表达水平.结果发现,PTEN缺失会导致rad51的表达降低.PI3K激酶为PTEN的下游负调节靶分子,使用PI3K激酶抑制剂LY294002处理缺陷型细胞后,其rad51表达升高.在PTEN野生型细胞中分别转染Flag-Akt WT(野生型)和Flag-Akt AC(组成型激活),或在PTEN缺陷型细胞中分别转染野生型PTEN和Akt-DN(失去激酶活性的Akt).利用RT-PCR技术检测上述细胞rad51的表达水平,同时利用Western印迹检测上述细胞RAD51蛋白的表达水平.结果发现,转染Flag-Akt WT和Flag-Akt AC后,均能促使PTEN野生型细胞中rad51在mRNA和蛋白水平降低;在PTEN缺陷型细胞中转染野生型PTEN或Akt-DN后,rad51在mRNA和蛋白水平均升高.在PTEN缺陷型细胞中使用siRNA沉默akt后,同样导致RAD51表达升高.结果提示,PTEN可以正向调节RAD51基因表达,PI3K/Akt是其信号通路机制之一.
- 陈忠民胡迎春莫琳霍艳英徐勤枝周平坤吴德昌
- 关键词:PTENRAD51实时定量PCRPI3K/AKT通路
- FOXO3a介导PTEN对DNA修复基因RAD51表达的调节作用
- 2011年
- 目的探讨转录因子FOXO3a在PTEN调节RAD51表达中的作用。方法利用Western印迹技术分析PTEN缺陷与否时,总FOXO3a以及细胞核内FOXO3a磷酸化的情况;转染外源AKT到PTEN野生型细胞或外源PTEN和失去激酶活性的AKT(AKT-DN)到PTEN缺陷型细胞,Western印迹检测核内FOXO3a的磷酸化情况。结果 PTEN缺失导致细胞核内FOXO3a磷酸化水平增高;外源PTEN可以降低PTEN缺陷型细胞核内FOXO3a的磷酸化水平,外源AKT可以增加PTEN野生型细胞核内FOXO3a的磷酸化水平;沉默FOXO3a在一定程度上导致RAD51表达水平下降。结论 FOXO3a可以结合到RAD51基因的启动子区,PI3K/AKT/FOXO3a信号通路是PTEN调节RAD51表达的重要方式之一。
- 陈忠民胡迎春徐勤枝周平坤吴德昌
- 关键词:FOXO3APTENDNA修复DNA断裂RAD51