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猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素的研究被引量：1: 2004年; 从五指山猪(WSZP)近交系第8～13代培育群中,先后选用21头5～10月龄青年母猪,分别于授精后25～30d采集胎儿106个,进行原始生殖嵴(PGCs)细胞分离、培养等建系技术研究。以DMEM+F10(1∶1)为基础培养液,按添加或不添加生长因子,将培养液分为A、B、C3种,并以STO细胞作饲养层,在38℃、5.0%CO2和湿润的气相中进行培养建系。结果获得胚胎生殖嵴细胞(EG)细胞系6个细胞株,其中1个EG细胞株传至11代、2个传至5代、1个传至4代、2个传至3代冻存。并进行了AKP染色、体外分化、冷冻-解冻复苏和嵌合体制作等鉴定研究。研究发现:不同胚龄对EG细胞建系具有一定影响,不同培养液对EG细胞建系效果不同,STO细胞饲养层的质量是建株、传代、冷冻-解冻复苏的关键因素之一。EG细胞系的初步建立,为今后筛选进入种系的EG细胞系、实施体外基因操作提供了可能。; 冯书堂董晓刘立新牟玉莲况玲陈红平张莉张勇张青峰; 关键词：胚龄培养液嵌合体囊胚

不同因素对五指山猪近交系表皮干细胞分离培养的影响: 2009年; 为了解不同因素对表皮干细胞(ESCs)分离培养的影响,以五指山猪近交系的耳组织为材料,分别从不同日龄猪、不同胶原、条件培养液和表皮生长因子等方面对ESCs分离培养的影响进行了研究。结果表明,根据ESCs所占表皮细胞约10%的比例,4日龄组和1月龄组适宜作为分离纯化表皮干细胞的材料;Ⅰ型胶原不适宜作为筛选表皮干细胞的基质;在没有饲养层的条件下,表皮干细胞的培养必须添加条件培养基;添加EGF对ESCs的生长有显著促进作用,而EGF各浓度之间影响差异不明显。; 岳文瑛常洁冯书堂; 关键词：表皮干细胞条件培养液表皮生长因子

猪卵丘卵母细胞复合体和裸卵中卵母细胞发育及基因表达差异的研究被引量：8: 2008年; 【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达。分离得到的差异表达基因在雌激素受体调节、细胞膜间的信息传导和细胞器物质运输等过程中发挥重要的作用。【结论】这些差异基因可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,对卵母细胞的成熟具有重要作用。; 朱桂玉冯书堂李吉涛牟玉莲潘登科郭炳冉; 关键词：猪卵母细胞体外成熟

五指山猪近交系精原干细胞体外培养研究被引量：15: 2006年; 对不同发育阶段五指山小型猪（WZSP）近交系的睾丸组织,采用不同的消化和培养方法进行了一系列的探索、研究.实验显示：培养SSCs的最佳时限为仔猪出生后1～20日龄;对不同日龄仔猪采用不同消化方法,以DMEM为基础培养液并添加不同成分,34℃,5%CO2培养箱中饱和湿度条件下培养,可获得较好的分离培养结果;原代SSCs在培养8d后,SSCs开始增殖,桑椹状的SSCs集落半悬浮隆突生长;SSCs集落AKP染色,细胞呈阳性反应;对SSCs细胞团在STO饲养层上进行传代培养,SSCs贴壁良好,培养4d左右大部分SSCs集落和单细胞消失;采用曲精细管组织贴壁培养法也同样获得桑椹状SSCs集落,细胞集落在培养5d后出现,半悬浮生长.此外,睾丸组织在4℃PBS液中存放24h后,仍可作为SSCs分离、培养的材料.结果表明：本研究初步掌握了WZSP近交系精原干细胞体外分离、培养的技术方法,为其进一步深入研究提供了技术方法和操作依据.; 成钢冯书堂; 关键词：五指山猪日龄体外培养

BRL-CM在昆白小鼠胚胎干细胞分离培养中的应用被引量：2: 2006年; 目的:探讨Buffalo大鼠肝细胞条件培养基(BRL-CM)在昆白小鼠胚胎干细胞(ES)分离培养中的应用。方法:用BRL-CM培养生长在STO(一种小鼠成纤维细胞)饲养层上的昆白小鼠的桑椹胚和囊胚,然后由囊胚内细胞团(ICM)得到ES细胞集落,在有饲养层和无饲养层时用BRL-CM培养分离得到的ES集落。结果:桑椹胚在上述培养条件下能发育成囊胚,然后囊胚在饲养层上长出ICM;用0.1%Trypsin-0.016%EDTA离散ICM,接种到饲养层上培养得到ES集落,ES集落能维持早期传代。结论:在分离培养昆白小鼠的ES细胞时,BRL-CM结合STO饲养层可以用来培养桑椹胚和囊胚,桑椹胚可以发育为囊胚并孵出内细胞团;同时,这种培养条件也能维持昆白小鼠ES细胞的增殖和早期传代。; 李三华曹斌云牟玉莲张莉冯书堂; 关键词：胚胎干细胞

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国家高技术研究发展计划(2003AA205100)