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转座子Tol2的特性及其在转基因动物中的应用被引量：3: 2009年; Tol2转座子是hAT转座子家族中的一员,是目前发现的唯一一个可以编码具有完整转座酶功能的自主性转座子。已证实Tol2转座子在斑马鱼、鼠、人等多种动物细胞中都具有转座活性,有可能作为脊椎动物特有的转座子系统,在转基因方面具有重要的应用前景。综述了Tol2转座子的结构、转座机制和在脊椎动物转基因生产中的最新研究进展,以期为今后这方面的研究提供参考。; 孟立张艳丽范钦龙黄荣王子玉王锋; 关键词：转基因脊椎动物

山羊β-乳球蛋白基因打靶载体的构建: 2011年; 【目的】构建山羊β-乳球蛋白(BLG)基因打靶载体,以期用人乳白蛋白(hALA)基因的编码区置换山羊BLG基因的编码区,借助BLG的内源性调控序列指导hALA的表达。【方法】以山羊血液基因组为模板PCR扩增获得BLG基因的5′端侧翼序列(BLG5)、第5外显子和第5内含子的部分序列(E5)和3′端侧翼序列(BLG3),同时以人血液基因组为模板克隆了hALA基因的基因组序列(ALA),并将上述片段连接到克隆载体pMD18 T-simple或pBluescript KS(-),得到载体pB5T,pB3T,pAKS和pAEKS。对pB5T进行亚克隆,将BLG5连接到pAEKS中,构建载体pBAE;最后将BLG5-hALA-E5和BLG3分别连接到打靶载体ploxpII中,标记为pBAT。【结果】经酶切和/或测序等鉴定,以上载体均正确。【结论】构建得到了旨在将hALA定向插入到山羊乳蛋白基因座位的打靶载体。; 胡林勇陈华涛李倩徐晓彬王爱华靳亚平; 关键词：基因打靶乳腺生物反应器 Β-乳球蛋白 Α-乳白蛋白山羊

精子因素对精子载体法制备转基因山羊的影响被引量：7: 2009年; 精子具有主动结合、转运、整合外源DNA的能力,并在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物。精子介导基因转移(sperm-mediated gene transfer,SMGT)是目前获得转基因动物简单而高效的方法之一。精子因素是影响SMGT方法生产转基因动物的重要方面。本论文结合我们的研究针对转染用山羊(Caprahircus)精液的来源、精子质膜完整性、精液品质及发育阶段等精子因素影响精子结合外源DNA和SMGT方法生产转基因山羊的效率进行了论述,并从这些影响因素入手,提出了筛选精子供体、保持精液品质、调控质膜等措施,提高精子转染外源DNA能力和生产转基因动物的效率。; 赵永聚; 关键词：山羊外源DNA 精子供体精子载体法

奶牛性控冷冻精液品质和转染外源DNA的特点被引量：1: 2010年; 本研究分析了奶牛性控冻精与普通冻精解冻后精液品质和转染外源DNA的特点。奶牛性控冻精与普通冻精解冻后,分别检测精液品质和精子超微结构,并与地高辛标记的线性化pEGFP-N1质粒共育转染,用免疫组化的方法检测精子转染外源DNA的效率。结果表明:性控冻精与普通冻精相比,有效精子数少(P<0.01),精子活力、顶体完整率差(P<0.05);2组精子超微结构都出现一定程度的顶体破裂、脱落等形态变化;2组精子都具有自动结合和转运外源DNA的能力,性控冻精转染率极显著高于普通冻精(P<0.01),分别为(11.34%±2.41%)和(7.30%±2.14%)。; 王岭斌于明举范景胜赵永聚; 关键词：性控精液冷冻保存外源DNA 奶牛

免疫组化检测CD4蛋白在不同物种生精过程中的表达: ＜正＞引言1971年Brackett发现哺乳动物精子可携带外源DNA,1989年Arezzo发现借助于精子载体可将外源质粒带入卵子,并可在胚胎中表达;同年lavitrano以小鼠精子为外源基因载体,获得了30%的阳性小鼠...; 于明举王岭斌陈俊颖罗艳梅赵从赵永聚; 关键词：山羊 CD4 免疫组化生精过程蛋白表达; 文献传递

含双筛选基因的人乳铁蛋白乳腺特异表达载体的构建及其表达: 为提高表达构件的表达水平和表达稳定性,采用CMV组成型启动子和牛αs1-CSN基因调控元件组成双启动子调控元件.为检验其表达状况,在上述调控元件中插入hLF cDNA,组成重组构件pbCNCS/LF36,为便于后续体细胞...; 袁玉国安礼友杨廷佳于宝利赵俊辉曹玉娟成勇; 关键词：人乳铁蛋白双启动子小鼠胎儿成纤维细胞荧光蛋白; 文献传递

精子结合与内化外源DNA的分子机制研究进展被引量：1: 2010年; 精子具有主动结合、转运、整合外源DNA的能力,并能在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物。精子介导基因转移(sperm-mediated gene transfer,SMGT)是目前获得转基因动物简单而高效的方法之一,但该方法存在着极大的随机性和不确定性。研究精子结合与内化外源DNA的分子机制、外源DNA进入精子后的定位及命运,对提高利用SMGT方法生产转基因动物效率和稳定性是十分重要的。精子与外源DNA的结合、内化和整合是受到严格调控的一种现象。; 赵永聚魏泓; 关键词：外源DNA 精子内化分子机制

山羊CD4分子在精子转染外源DNA中的功能研究: 引言精子转染外源DNA是受到严格调控的一种现象。由于其操作简便,成本较低等优点,目前已成功的在小鼠、猪、兔、牛、羊等物种上获得了转基因动物,其中小鼠、猪、兔建立了表达外源基因的转基因品系。; 王岭斌于明举范景胜穆飙谢畅赵永聚; 关键词：山羊精子 CD4分子外源DNA; 文献传递

山羊活体采卵技术(LOPU)影响因素及应用研究进展: 活体采卵(laparoscopic ovum pick-up,LOPU)是继动物体外受精、胚胎移植技术之后应运而生的一项胚胎工程技术,目前在一些畜牧业发达的国家,如日本、加拿大、美国、荷兰均已实现商业化生产。该技术与胚胎...; 赵从谢畅穆飙赵永聚; 文献传递

奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及SRY基因性别鉴定被引量：2: 2010年; 为了探索和建立奶山羊胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验用组织块培养法分离纯化得到两株奶山羊胎儿成纤维细胞系,进行细胞形态观察、生长曲线及细胞周期和倍性分析。同时根据GenBank上发布的山羊SRY基因设计合成一对PCR引物作为性别鉴定引物,另外根据山羊BLG基因序列设计一对引物作为内参引物,建立PCR反应体系对两株胎儿成纤维细胞系进行性别鉴定。结果表明,分离的胎儿成纤维细胞活力良好,可在体外快速生长、增殖、稳定培养;阳性对照和山羊胎儿成纤维细胞系2经PCR扩增得到337 bp片段和498 bp的BLG基因片段,而阴性对照和山羊胎儿成纤维细胞系1经PCR扩增得到498 bp的β-乳球蛋白基因片段。将337 bp片段和pMD19-T载体连接,构建重组载体pSRY,通过测序证明337 bp片段为SRY基因片段。这说明有337 bp扩增带的细胞系为雄性,无337 bp扩增带的细胞系为雌性。本试验为转基因奶山羊新品种的培育奠定了基础。; 陈华涛胡林勇杨艳李倩靳亚平; 关键词：奶山羊成纤维细胞 SRY基因性别鉴定

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