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TNF-α对牙周膜干细胞和颌骨骨髓间充质干细胞自噬水平的影响被引量：8: 2015年; 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)和颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)两种干细胞自噬水平的影响。方法:通过胰酶消化法体外分离培养PDLSCs/JBMMSCs,流式细胞仪及实时定量RT-PCR筛选短时间内不导致细胞凋亡的TNF-α的最大浓度,然后与PDLSCs/JBMMSCs共培养,Western blot检测不同时间点两种细胞自噬和凋亡的表达水平。结果:成功地筛选出TNF-α的最佳浓度为50 ng/m L。采用该浓度作用于PDLSCs/JBMMSCs,短期作用(24 h)可以激活细胞的自噬水平,凋亡水平下降;如果TNF-α持续作用,细胞的自噬水平反而下降,凋亡增加。结论:在一定的条件下,TNF-α可以激活PDLSCs/JBMMSCs的自噬水平,免于细胞发生凋亡。; 安莹张立强薛芃刘文佳王勤涛金岩; 关键词：牙周膜干细胞肿瘤坏死因子自噬

亚精胺促进雌激素缺乏小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化并抑制其成脂分化被引量：5: 2015年; 目的研究亚精胺(SPD)对骨髓间充质干细胞(BMMSC)分化能力的影响。方法雌性C57/BL6J小鼠分为假手术(Sham)组、卵巢摘除术(OVX)组。术后2月,分离、培养OVX组和Sham组C57BL/6J小鼠的BMMSC。经Western blot法检测对比2组BMMSC的碱性磷酸酶(ALP)、runt相关转录因子2(Runx2)以及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂蛋白脂解酶(LPL)的蛋白水平,茜素红染色对比2组BMMSC的矿化程度差异,油红O染色对比2组BMMSC脂滴数量差异。以SPD干预OVX组小鼠的BMMSC,Western blot法检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL蛋白水平,反转录PCR检测Runx2、ALP、PPARγ、LPL mRNA水平;茜素红染色检测矿化结节及油红O染色检测脂滴数量。结果 OVX组小鼠来源的BMMSC成骨分化能力低于Sham组,成脂能力高于Sham组。经SPD干预后,OVX来源的BMMSC的成骨分化能力较未干预增强,成脂分化能力减弱。结论 SPD能够促进雌激素缺乏所致骨质疏松小鼠BMMSC的成骨分化并抑制其成脂分化。; 戚朦刘文佳马洋杨燚金岩; 关键词：骨髓间充质干细胞成骨分化成脂分化亚精胺

Malassez上皮剩余对衰老牙周膜干细胞成骨能力的影响: 2016年; 目的:研究牙周组织中Malassez上皮剩余(ERM)对衰老组织来源的牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨能力的影响。方法:从健康青年及老年志愿者的牙周组织中分别获得健康牙周膜干细胞(H-PDLSCs)和衰老牙周膜干细胞(Aged-PDLSCs)。低密度培养法对其进行分离纯化,流式细胞术鉴定其表型。差速消化法获取健康牙周组织中的ERM;倒置相差显微镜下观察其形态,免疫荧光鉴定其表型。用transwwell小室构建ERM与Aged-PDLSCs的共培养体系,取小室下层Aged-PDLSCs,RT-PCR技术检测其ALP和Runx-2 mRNA表达水平,ALP及茜素红染色观察其成骨分化能力。结果:Aged-PDLSCs与ERM共培养组经成骨诱导后,与单独培养组相比,其成骨相关基因ALP、Runx-2 mRNA表达水平均明显上调(P<0.05);ALP染色变深,矿化结节的形成也显著增加。结论:Malassez上皮剩余能增强衰老PDLSCs的成骨分化能力。; 夏宇李彦浇金钫刘文佳; 关键词：成骨分化共培养

自噬对小鼠骨髓间充质干细胞干性标记基因的影响被引量：3: 2014年; 目的:研究细胞自噬水平改变后,对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)干性标记基因Nanog、Oct-4、Sox-Ⅱ表达的影响。方法:分离培养小鼠BMMSCs,经表型鉴定后,分别利用自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin)和靶向作用于beclin 1的si-RNA(small interfernce RNA target beclin 1,si-beclin 1)激活或抑制小鼠BMMSCs的自噬活性;利用实时定量PCR仪(Real-time PCR,RT-PCR)检测各组BMMSCs的各自噬相关基因以及干性标记基因的表达水平。结果:流式细胞仪检测结果显示,小鼠BMMCs中CD90.2、CD29、SCA-1的阳性率分别为97.4%、97.6%、83.5%,CD31、CD146、CD11b的阳性率分别为2.9%、2.4%、5.6%;雷帕霉素激活BMMSCs自噬后,其干性标记基因Nanog、Oct-4、Sox-Ⅱ的表达均较对照组明显升高(P<0.05),而用si-beclin 1抑制BMMSCs的自噬活性后,Nanog、Oct-4、Sox-Ⅱ的表达均较对照组明显下降(P<0.05)。结论:提高BMMSCs的自噬水平有助于保持干细胞的特异性基因表达。; 雒可夫刘文佳陈吉华金岩; 关键词：自噬骨髓间充质干细胞

自然衰老小鼠骨髓间充质干细胞增龄性改变的研究被引量：2: 2014年; 目的:探讨自然衰老小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)在衰老过程中生物学特点的改变。方法:分离、培养年轻(2月龄)、年老(16月龄)C57/BL6J小鼠的BMMSCs,经干细胞表面分子鉴定后,Western Blot检测2组BMMSCs的Tert、Acetyl-P53蛋白表达水平;氧化应激活性氧(ROS)试剂盒检测ROS表达水平;流式细胞仪检测并比较两组细胞的增殖、凋亡状态。结果:年轻、年老小鼠BMMSCs阳性表达Sca-1,阴性表达CD34、CD45,符合间充质干细胞表达特性;年老小鼠BMMSCs Tert蛋白表达水平明显低于年轻组(P<0.05),Acetyl-P53蛋白表达水平明显高于年轻组(P<0.05);年老细胞ROS表达水平明显高于年轻组;年老细胞的增殖能力明显低于年轻组(P<0.05),而凋亡水平则明显高于年轻组(P<0.05)。结论:年老小鼠BMMSCs出现增龄性变化,这些变化可能在骨衰老中起着重要作用。; 马洋刘文佳戚朦金岩; 关键词：衰老端粒 P53 ROS

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国家自然科学基金(31200972)