广东省海洋渔业科技推广专项项目(A200899D02)
- 作品数：15 被引量：99H指数：7
- 相关作者：梁旭方王琳余锐彭敏燕方荣更多>>
- 相关机构：暨南大学华中农业大学中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：广东省海洋渔业科技推广专项项目广州市番禺区科技计划项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鳜鱼胰蛋白酶和淀粉酶与胃蛋白酶原基因的克隆与序列分析被引量：9
- 2009年
- 采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜鱼(Siniperca chuatsi)肝胰脏胰蛋白酶(trypsin,Try)、淀粉酶(amylase,Amy)基因cDNA全序列.结果表明,鳜鱼Try基因cDNA全长为896 bp,其中开放阅读框(openreadingframe,ORF)为744 bp,编码247个氨基酸.序列同源性分析发现,鳜鱼Try与斑马鱼(Danio rerio)、非洲爪蟾(Xenopus laevis)、小鼠Try和人TRY氨基酸序列同源性分别为81.4%、75.3%、74.5%和71.4%.鳜鱼Amy基因cDNA全长为1 647 bp,其中ORF为1 539 bp,编码512个氨基酸.鳜鱼Amy与斑马鱼、非洲爪蟾、小鼠Amy和人AMY氨基酸序列同源性分别为79.7%、75.4%、71.9%和70.9%.同时对鳜鱼基因组进行PCR,获得鳜鱼Try、Amy与胃蛋白酶原(pepsinogen,Pep)全基因组DNA序列.序列分析表明,鳜鱼Try基因由4个内含子和5个外显子组成,全长1 362 bp;鳜鱼Amy基因由8个内含子和9个外显子组成,全长4 267 bp;鳜鱼Pep基因由8个内含子和9个外显子组成,全长4 032 bp,与其它脊椎动物基因结构相似.应用Genome walker方法在鳜鱼克隆得到长度分别为1 189 bp、413 bp和527 bp的Try、Amy和Pep基因的5′侧翼区序列以及1段长为704 bp的Pep基因3′侧翼区序列,并利用相关软件预测其中具有多个可调节其表达的调控元件.鳜鱼Try、Amy和Pep基因组全序列的克隆及其序列、结构分析和分子系统进化等的研究,为鱼类消化代谢相关基因的生理功能及表达调控机理进一步研究提供依据.
- 陈亮梁旭方王琳李观贵林群刘秀霞
- 关键词：胰蛋白酶淀粉酶胃蛋白酶原基因结构
- 鳜胰蛋白酶基因外显子3上SNP G169A位点鉴定和四种不同检测方法的比较被引量：1
- 2011年
- 采用PCR产物直接测序法(DS)对鳜(Siniperca chuatsi)胰蛋白酶基因(TRY)进行单核苷酸多态性(SNPs)分析,发现外显子3上的G169A多态性。对312个样品进行分析,共发现三种基因型GG、GA、AA,其基因型频率分别为0.26、0.54、0.20,两个等位基因G和A的基因频率分别为0.53和0.47。用创造限制性酶切位点法PCR(CRS-PCR)、单管双向等位基因专一性扩增(SB-ASA)和单链构象多态性分析(PCR-SSCP)对该SNP位点进行验证。结果表明,CRS-PCR法不能对该SNP位点分型,PCR-SSCP和SB-ASA法可以且准确度分别为100%和96.67%。
- 于海静梁旭方方荣彭敏燕朱滔
- 关键词：单核苷酸多态性直接测序法单链构象多态性分析
- 鳜脂蛋白脂酶和肝脂酶基因结构与组织表达被引量：11
- 2009年
- 为了研究鳜(Siniperca chuatsi)脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)基因结构与功能关系,首先采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜肝脏LPL与HL基因cDNA全序列。鳜肝脏LPL基因cDNA全长为2089bp,其中开放阅读框(ORF)为1548bp,编码515个氨基酸。鳜HL基因cDNA全长为1964bp,其中ORF为1494bp,编码497个氨基酸。进化树分析显示,鳜LPL与HL基因与其他脊椎动物的LPL、HL基因各自聚集成簇。对鳜基因组进行PCR获得鳜LPL与HL全基因组DNA序列,与其他脊椎动物基因结构相似,鳜LPL基因由10个外显子和9个内含子组成,全长7392bp;鳜HL基因由9个外显子和8个内含子组成,全长8837bp。应用Genome Walker方法在鳜克隆得到一段长为1071bp的LPL和一段长为2173bp的HL基因5′侧翼区序列,并利用相关软件预测其中具有多个保守的顺式调控元件。组织表达研究显示与易患动脉粥样硬化的人类LPL不同,鳜LPL基因在所有被检测组织中均有表达:在脂肪组织中大量表达,其次是肝脏、脑、肠道、肌肉,在脾中表达量最低;而鳜HL基因的表达则与人类相似,只在肝脏中表达。本研究将为深入探讨机体脂质代谢调节机制以及LPL、HL在防治动脉粥样硬化中的作用奠定良好基础。
- 姚煜梁旭方李光照王琳刘秀霞
- 关键词：脂蛋白脂酶肝脂酶CDNA序列基因结构
- 鳜脂蛋白脂酶基因SNP及其与食性驯化相关性分析被引量：5
- 2011年
- 鳜食性奇特,通常情况下拒食死饵或配合饲料,在长期的养殖过程中发现:通过驯养,能逐步诱导部分鳜以非活饵为食。通过分子标记定向选育易驯化鳜并使用人工饲料大规模养殖,可以有效解决鳜养殖中存在的成本高、污染严重、病害严重等问题。脂蛋白脂酶基因(Lipoprotein lipase LPL)是脂蛋白代谢的关键酶之一,生理功能是将乳糜微粒和极低密度脂蛋白核心的甘油三酯催化分解为甘油和脂肪酸,以供组织氧化供能和贮存。文章采用PCR产物直接测序法对鳜脂蛋白脂酶基因6、7内含子和6、7、8外显子进行了SNPs遗传多态性检测和分析,探寻LPL基因的等位基因及其基因型在两个食性驯化表型群体中的分布情况。结果在第7外显子处共检测到3个SNPs位点(A25T、G26T和C29G),其中A25T、C29G两个为非同义突变。利用卡方检验分析驯化与未驯化组,结果表明LPL基因3个SNPs位点对鳜的食性驯化不具显著差异性(P>0.05)。将3个SNPs位点不同基因型组合成5种双倍型,卡方检验表明双倍型Dip2在两组中存在显著差异(P<0.05)。文章成功完成鳜LPL基因组部分区段多态性分析,因而可以考虑将LPL基因作为影响鳜食性驯化的候选基因,作为遗传标记,为今后的标记辅助选择育种工作奠定基础,具有广泛的应用前景。
- 杨宇晖梁旭方方荣彭敏燕黄志东
- 关键词：脂蛋白脂酶单核苷酸多态性食性驯化
- 鳜鱼肥胖基因的克隆与组织表达被引量：3
- 2010年
- 为了研究脊椎动物肥胖基因(obese gene,ob)结构与功能关系,利用PCR和RACE方法克隆得到鳜鱼肥胖基因全长序列:鳜鱼ob基因全长1 398 bp,由2个外显子和1个内含子构成,其完整的开放阅读框由486 bp组成,编码161个氨基酸.应用Genome Walker方法克隆得到一段长为357 bp的鳜鱼ob基因5′侧翼区序列,并利用相关软件预测其中具有多个保守的顺式调控元件.我们将克隆得到的鳜鱼ob基因编码氨基酸序列leptin与其他物种leptin序列分别进行同源性比较,并构建系统进化树,发现虽然不同物种间leptin序列差异非常大,但进化树分析显示所有的leptin序列,包括哺乳动物、两栖动物和真骨鱼类,各自聚集成簇.最后通过荧光实时定量PCR方法研究鳜鱼不同组织ob基因的表达水平,与哺乳动物ob基因主要在脂肪组织表达分布不同,鳜鱼ob基因在所有被检测组织中均有表达,在肝脏组织中大量表达,其次是脑,在肠道、脂肪、脾和肌肉中只有微量表达,说明鱼类ob基因的表达分布及其调控机制可能与哺乳动物存在差别.
- 李光照梁旭方陈亮王琳
- 关键词：肥胖基因基因克隆鳜鱼
- 鳜鱼3个养殖群体经济性状及遗传多样性分析被引量：7
- 2012年
- 测量了1、2月龄广东、湖南和湖北鳜鱼3个养殖群体的各性状指标,分析了2月龄鳜鱼全长、体长等主要性状与体质量间的相关性,并对鳜鱼3个养殖群体的mtDNA控制区核苷酸序列进行测定。形态-体质量指标相关性分析表明,全长—体质量、体长—体质量之间的相关性极显著(r>0.9,P<0.01)。对鳜鱼3个养殖群体经济性状的比较结果显示,长江中游鳜鱼养殖群体的体长和体高日增长率均比广东鳜鱼养殖群体高。采用特异性引物对鳜鱼基因组进行PCR扩增,得到3个地区鳜鱼线粒体DNA控制区的全序列(830～834bp)。遗传多样性分析结果表明,长江中游地区鳜鱼养殖群体的遗传多样性比广东鳜鱼养殖群体高。因此,与广东鳜鱼养殖群体相比,长江中游群体具有更高的养殖经济价值和育种价值。
- 余锐梁旭方易提林张进骆小年王乾
- 关键词：鳜鱼经济性状相关系数MTDNA
- 高温季节鳜及饵料鱼池塘浮游生物调查研究被引量：3
- 2012年
- 于高温多雨季节对广东省清远市鳜养殖基地的6个鳜(Siniperca chuatsi)及饵料鱼养殖池塘发病前后的浮游生物组成进行了调查分析。结果表明,易发病池塘,水中浮游生物总生物量比其他池塘略低。浮游植物优势种均为微囊藻(Microcystis sp.),颤藻(Oscillatoria sp)等蓝藻。此外,池塘出现出血病症状时,浮游生物的马格利夫(Margalef)丰度指数和香农(Shannon-weaver)多样性指数均处于较低水平,这两项指数可作为池塘发病的预警参考指标。在实际生产中,平时应注意调节水质,以稳定水中浮游生物的数量和组成,在天气不佳时更应多加巡塘,以便及早发现病情。
- 程炜轩梁旭方余锐符云叶卫
- 关键词：池塘养殖浮游植物浮游动物
- 广东与江西翘嘴鳜养殖与天然种群的遗传多态性分析被引量：12
- 2010年
- 对翘嘴鳜4个人工繁殖群体[江西南昌国家级翘嘴鳜原种场(1个群体)、广东南海人工繁殖群体(2个群体)、广东惠州人工繁殖群体(1个群体)]及2个天然群体(江西鄱阳湖养1个月;江西鄱阳湖养2～3d)共60尾的线粒体控制区(D-loop)核苷酸序列进行扩增后测序和遗传多态性分析。采用特异性引物对翘嘴鳜基因组进行PCR扩增,得到翘嘴鳜线粒体DNA控制区基因的全序列(833bp)。分析得到的D-loop区碱基序列中60个个体共检测到65个变异位点,其中43个是单一变异位点,22个为简约信息位点。60个个体共检测出22个单倍型。分析结果表明,江西两个天然群体基因交流充分,未出现遗传分化,但相对江西省翘嘴鳜原种,广东省翘嘴鳜养殖种群多态性偏低。因此,广东省从其他省鳜鱼原种场引进翘嘴鳜原种是非常有必要的,这对我国集约化主产区广东省的鳜鱼产业向高效、优质的方向持续健康发展具有重要意义。
- 杨宇晖梁旭方林群李锦光王琳谢骏
- 关键词：翘嘴鳜线粒体DNA控制区遗传多态性
- 翘嘴鳜人工雌核发育的初步研究被引量：3
- 2012年
- 采用紫外线照射灭活精子,经冷休克诱导染色体加倍的方法对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)进行人工诱导雌核发育育种。灭活翘嘴鳜精子,紫外线照射剂量80 mJ/cm2是最佳的辐射剂量。冷休克结果表明,在0～3℃冰水下,冷休克起始时间为授精后3～7 min均有效,以5 min为最适;冷休克持续时间10-50 min均有效,以30 min最佳。综合以上两项因素,授精5 min后,休克时间持续30 min组的原肠胚存活率和孵化率均为最高,与其他处理组差异显著(P<0.05),此时雌核发育率最高,达到4.72%。
- 余锐梁旭方张进易提林符云叶卫
- 关键词：雌核发育冷休克二倍体
- 翘嘴鳜EST-SSR标记的开发及3个群体遗传多态性分析被引量：12
- 2013年
- 为保护野生翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)的种质资源以及遗传育种,本研究从翘嘴鳜的EST文库中开发微卫星并筛选出22对具有多态性的微卫星标记,对来自陆水水库(赤壁)和沅江流域(常德、怀化)的3个野生群体进行了遗传多样性分析.实验结果显示,这些标记在3个群体中均表现出了丰富的多态性;共检测到134个等位基因;各基因座观测等位基因数4～8个;平均等位基因数为6.090 1;观测杂合度0.675 4;期望杂合度0.748 7;多态信息含量0.701 0,表明3个翘嘴鳜群体在各检测位点中具有较好多态性.对数据进行F-检测,平均Fst值为0.038 3,说明群体间的遗传分化程度低;而群体遗传相似度和遗传距离的计算结果显示:常德和怀化群体的遗传相似度最大,遗传距离最小;而常德与赤壁群体的遗传相似度最小,遗传距离最大.这恰恰与翘嘴鳜群体的流域分布一致.
- 朱滔梁旭方彭敏燕于海静皮达峰
- 关键词：翘嘴鳜野生群体
