国家自然科学基金(81172007)
- 作品数：4 被引量：19H指数：2
- 相关作者：卢山陈秀彬刘平陈昊孟晨更多>>
- 相关机构：南京师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白含量检测的抗干扰新方法被引量：3
- 2012年
- 为提高蛋白质含量检测方法的抗干扰能力,从福林酚试剂法入手,以牛血清白蛋白为标准样品,重新设计制定实验试剂组成与配比等,获得蛋白质含量检测新方法,然后探讨新方法的适用检测波长范围和稳定性,并利用细胞全蛋白裂解液分析它对多种常见干扰物质的包容性。实验发现,新方法不仅能准确检测蛋白质含量,对蛋白质测定液中表面活性剂的耐受浓度,如十二烷基硫酸钠(SDS)、NP-40和TritonX-100分别达到10%、2%和1%;螯合剂乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)和Ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid(EGTA)则分别达25 mmol/L和1 mmol/L;对还原剂二硫苏糖醇(DTT)和β-ME的包容浓度均为1 mmol/L;而含氮化合物硫酸铵与尿素则分别为0.5 mol/L和4 mol/L。与原方法相比较,对常见干扰物质的耐受性有显著提高,说明新方法适用含多种干扰物质的蛋白质溶液,在生命科学研究领域具有广泛应用前景。
- 董源汤灵玲林林卢山
- 关键词：表面活性剂螯合剂还原剂含氮化合物耐受性
- 前列腺癌细胞中多烯紫杉醇下调Smad3不依赖TGF-β1信号被引量：2
- 2016年
- 多烯紫杉醇(Docetaxel,DOC)来源于欧洲红豆杉针叶,作为紫杉烷类抗癌药物,已被广泛应用于多种癌症临床治疗中,但相关机理还有很多不清楚的地方.本研究主要通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)等方法观察有TGF-b信号存在的前列腺癌细胞PC-3中DOC对Smad3表达水平的调控作用,再利用TGF-b RII缺失的前列腺癌细胞LNCa P来探讨不依赖TGF-b1信号时DOC对细胞生长、Smad3表达的影响及其分子机制.结果发现DOC不仅能以时间和浓度依赖方式下调PC-3细胞中Smad3的m RNA和蛋白表达水平,也能在LNCa P细胞中选择性地降低Smad3表达水平和抑制细胞生长,还能减少几乎不含TGF-b1的PC-3细胞中Smad3表达水平.同时,两种细胞中Stat1表达水平均受到DOC显著抑制,而且,Stat1和Smad3能相互结合形成复合体.进一步分析Smad3核心启动子区域也预测存在5个Stat1结合位点.这些结果说明DOC下调Smad3不依赖于TGF-b1信号通路,且可能是通过调控Stat1在Smad3启动子内的结合来作用.
- 皮玉瑞李同辉陈秀彬刘平卢山
- 关键词：多烯紫杉醇SMAD3前列腺癌下调
- 前列腺癌细胞中TNS4新突变体及其作用机制初探
- 2018年
- 目的:检测前列腺癌细胞中张力蛋白家族第四成员(tensin family member 4,TNS 4)基因的表达和突变情况,并探讨其潜在的作用机制。方法:采用RT-PCR法分析多种前列腺癌细胞中TNS 4基因表达;并扩增TNS 4基因的全长cDNA,进行限制性核酸内切酶水解和DNA测序分析。构建TNS 4基因野生型和突变体重组质粒,转染前列腺癌PC-3细胞,然后采用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫荧光染色法分别测定野生型和突变体TNS4过表达对信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)mRNA、蛋白表达及定位的影响。结果:与良性前列腺增生细胞BPH1相比,前列腺癌DU145、LNCaP和22Rv1细胞中TNS 4基因呈低表达(P值均<0.01),而前列腺癌PC-3细胞中几乎没有TNS 4基因表达。分析TNS 4基因的全长cDNA序列后发现,前列腺癌DU145和LNCaP细胞中TNS 4基因存在突变位点T427C和G1455A,其中T427C突变导致对应氨基酸构成发生转变(S143P)。成功构建TNS 4基因突变体重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-Mut和野生型TNS 4基因重组质粒pcDNA3.1(+)-TNS4-WT并转染前列腺癌PC-3细胞后,TNS4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05),STAT 1基因转录水平未见明显变化(P>0.05),但STAT1蛋白表达水平明显升高(P值均<0.05),而且TNS 4基因突变体过表达能够明显促进STAT1蛋白进入细胞核(P<0.01)。结论:前列腺癌细胞中TNS 4基因明显低表达,且存在新的TNS4突变体(S143P);过表达TNS4能够上调STAT1蛋白的表达水平,而且TNS4突变体过表达会进一步改变STAT1蛋白的细胞定位。
- 陈秀彬王方方皮玉瑞张玉刘平卢山
- 关键词：前列腺肿瘤点突变信号转导与转录激活因子
- 自组装法制备茶多酚-明胶-壳聚糖纳米粒及其性质表征被引量：14
- 2014年
- 将茶多酚(tea polyphenol,TP)、明胶(gelatin,Gel)和壳聚糖(chitosan,Cs)自组装成茶多酚纳米粒,其中,明胶与壳聚糖通过静电结合形成可溶性复合物,茶多酚与糖基化修饰的明胶通过非共价键组装,最后形成茶多酚-明胶-壳聚糖(TP-Gel-Cs)纳米粒。经工艺筛选,3种成分的最佳质量比为1.5∶3∶1。对TP-Gel-Cs纳米粒进行理化性质、稳定性和体外释放特性评价。结果表明,TP-Gel-Cs纳米粒内存在非共价键,该体系能够有效包载茶多酚,载药量为26.82%,包封率为90.42%,平均粒径为971.50 nm,分散指数为0.22,在中性条件下荷负电,在pH 5.4条件下荷正电;在室温下,茶多酚的稳定性显著提高;TP-Gel-Cs纳米粒呈现pH敏感且缓慢的体外释放特性。该制备工艺绿色、温和、简便,可以发展为多酚类物质的纳米载药体系。
- 张茵孟晨常俊沙莎陈昊卢梭
- 关键词：茶多酚明胶壳聚糖纳米粒自组装
