国家自然科学基金(31200979)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
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- 相关机构：华侨大学福建医科大学中国药科大学更多>>
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- Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用
- 2016年
- 多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.
- 饶华春滕继云刁勇宋沁馨王立强杨会勇周国华
- 关键词：焦磷酸测序禽流感病毒
- 等位基因特异性扩增法在SNP分型中的研究进展被引量：7
- 2013年
- 单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)因其分布广、数量大而在疾病研究特别是多基因疾病研究领域显示出巨大的优势,因此临床研究和诊断需要一种快速、简易、准确、经济的SNP检测方法。近年来,等位基因特异性扩增法(Allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)因其操作简单、成本低廉和结果准确而在SNP检测领域显示了巨大应用潜力,并受到越来越多相关科研和医务工作者的关注。系统的对AS-PCR技术在SNP分型中的研究进展和应用作了全面综述,对其发展方向和应用前景进行了展望。认为通过与其他检测平台联合,AS-PCR可促进SNP检测技术由实验室向临床应用转化的进程,为诸多疑难疾病的防治提供新的思路和参考。
- 王清瑶饶华春刁勇杨会勇
- 关键词：单核苷酸多态性基因分型
- 单核苷酸多态性在痛风发病中的分子机制及基因诊断的研究进展被引量：1
- 2013年
- 痛风是一种单钠尿酸盐沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱及（或）尿酸排泄减少所致高尿酸血症直接相关，属于代谢性风湿病范畴。痛风发病有明显的异质性，除高尿酸血症外，还可表现为关节炎、痛风石、尿酸性尿路结石和慢性肾小管．间质性肾炎等，尿酸升高常伴发代谢综合征如腹型肥胖、高脂血症、高血压、胰岛素抵抗以及心血管疾病等。从20世纪90年代开始，我国原发性痛风的患病率逐年上升，发病年龄呈现低龄化，已成为危害人民健康的常见病。2005年的山东沿海地区流行病学调查显示高尿酸血症的患病率为13．19％、痛风为1．14％。因此加大对痛风发病分子机制的研究已成为痛风早发现、早预防和早治疗的基础和关键。
- 杨会勇许超尘王清瑶郑晨娜游玉权林俊生刁勇
- 关键词：发病分子机制单核苷酸多态性痛风石基因诊断尿酸性尿路结石尿酸排泄减少
- IL-1、IL-10及TNF-β单核苷酸多态性与福建泉州地区汉族人群类风湿性关节炎的相关性研究被引量：5
- 2020年
- 目的:探讨福建泉州地区汉族人群类风湿性关节炎(RA)患者炎症相关因子的单核苷酸多态性(SNP)位点的分布特征,并研究其与RA易感性的关系。方法:选取福建泉州地区汉族人群RA患者155例(RA组)和健康体检者170例(对照组)为研究对象,采用全血三引物等位基因特异性扩增(TRIP-ASPCR)技术对RA相关的SNP位点进行基因分型。运用SPSS 19.0统计分析软件,采用卡方检验和Logistic法分析Hardy-Weinberg遗传平衡吻合度、SNP位点等位基因与RA发病关联强度,并利用SHEsis软件对所选SNP位点进行连锁不平衡分析和单倍型分析。结果:对照组中有1个SNP位点符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05),RA组有1个SNP位点符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05);在对照组和RA组之间有4个SNP位点的等位基因频率差异存在统计学意义(P<0.05,OR>1),与RA呈正相关,且相关性明显。结论:RA患者中,存在4个SNP位点(IL-10 rs1800893、IL-1βrs16944、TNF-βrs2009658和TNF-βrs1041981)与福建泉州地区汉族人群的RA呈正相关,且相关性明显;各位点分别对应的等位基因G、G、C和C可能作为福建泉州地区汉族人群RA的一个潜在遗传标志。
- 张淑花杨会勇郑晨娜蔡志谋沈晓丽
- 关键词：类风湿性关节炎单核苷酸多态性
- 转录因子和转录激活因子4人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4和染色体9p21．3遗传多态性与闽南地区人群类风湿关节炎相关性研究
- 2016年
- 目的探讨转录因子和转录激活因子4（STAT4）rs7574865、人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）rs3087243基因以及染色体9p21.3 rs1333049单核苷酸多态性（SNPs）与闽南地区人群RA的关联。方法选取119例RA患者和125名健康对照者，应用三引物扩增法（AS-PCR）对RA相关的3个SNPs位点进行基因分型，并应用SPSS 18.0统计软件分析不同基因型与RA发病的相关性。采用χ2检验和Logistic回归模型进行分析。结果RA组STAT4 rs7574865各基因型分布频率与健康对照组比较，差异有统计学意义（P〈0.01），与G/T杂合基因型相比，TT与GG纯合性携带者患病风险要低（OR=0.498和0.300，P=0.018和P=0.002）；CTLA-4 rs3087243各基因型分布频率与健康对照组比较，差异无统计学意义（χ^2=4.083，P=0.130），但根据计算，其中与A/G基因型相比，GG型携带者患病风险要低（OR=0.580，P=0.04）；9p21.3上的SNP（rs1333049）无论基因型还是等位基因在RA与健康志愿者组间差异无统计学意义，但是经计算发现与GG基因型携带者相比，CC和GC携带者发病风险要低（OR=0.565，P=0.049 5）。结论STAT4 rs7574865和CTLA-4 rs3087243和rs1333049与闽南地区人群RA发病均有一定相关性。
- 郑晨娜饶华春罗彩林王清瑶杨会勇刁勇
- 关键词：类风湿单核苷酸
