国家科技重大专项(2011ZX09401-403)
- 作品数：11 被引量：28H指数：3
- 相关作者：赵志强王欣茹刘方蕾谢贵林刘佳更多>>
- 相关机构：兰州生物制品研究所有限责任公司中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 丙二醇头孢曲嗪的合成被引量：2
- 2014年
- 目的合成丙二醇头孢曲嗪。方法 7-ACA与5-巯基-1,2,3-三唑钾盐反应制备得到头孢曲嗪中间体7-TACA,再与D-(-)-对羟基苯甘氨酸邓钾盐缩合,得到甲醇头孢曲嗪,纯化后制得丙二醇头孢曲嗪。结果产品总收率32.4%,质量符合日本药典标准。结论本工艺简单易行,为中试生产提供了依据。
- 陈林石克金李江红张静霞曾志旋曹胜华
- 关键词：7-ACA
- 重组α-氨基酸酯水解酶合成头孢曲嗪被引量：1
- 2013年
- 为了探索酶法合成头孢曲嗪的产业化工艺路线,从红纹黄单胞菌Xanthomonas rubrillineans中克隆-氨基酸酯水解酶基因全序列,转化入大肠杆菌中表达。以头孢曲嗪的合成转化率为指标,分别考察纯化的重组-氨基酸酯水解酶合成头孢曲嗪的最适温度、最适pH和最佳底物摩尔比。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,重组-氨基酸酯水解酶的单体分子量为70 kDa。催化合成头孢曲嗪的最适pH为(6.0±0.1),最适温度为36℃。底物浓度约为7-ATTC 30 mmol/L、HPGM HCl 120 mmol/L,酶用量22 U/mL时,头孢曲嗪的转化率达到64.3%。结果为优化酶法合成头孢曲嗪的产业化工艺奠定了基础。
- 潘佳林王辂李端华叶丽娟
- 关键词：动力学控制转化率
- 细菌内毒素检查法在肺炎球菌结合疫苗研制中的应用及验证被引量：1
- 2017年
- 目的应用细菌内毒素检查法(动态浊度法)检测13价肺炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量,并对该方法进行验证。方法用《中国药典》三部(2010版)载录的动态浊度法检查疫苗原辅材料、疫苗过程产物及疫苗细菌内毒素含量,并进行肺炎球菌结合疫苗原液和成品的细菌内毒素含量检测,验证方法的可行性及准确性。结果 13价肺炎球菌结合疫苗生产使用试剂、相关原辅材料和磷酸铝佐剂对细菌内毒素检查无影响;该方法线性、专属性、准确性、精密度、耐用性良好,检定范围初步定为0.08~10 EU/ml,定量限度暂定为0.03 EU/ml;可准确测定疫苗原液和成品中细菌内毒素含量,重复性和准确性良好。结论动态浊度法检测13价肺炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量,结果准确、稳定,符合方法验证的要求,可为该疫苗的质量控制提供稳定可靠的检测方法。
- 吴兵刘方蕾李燕婷罗树权毛睿范锋锋于旭博胡浩沈荣赵志强谢贵林
- 关键词：细菌内毒素检查动态浊度法肺炎球菌结合疫苗
- 2种14型肺炎球菌多糖-蛋白结合物的制备及免疫原性比较被引量：2
- 2016年
- 目的:以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)衍生的TT(TTAH)分别作为载体蛋白制备14型肺炎球菌多糖-蛋白结合物,比较2种结合物在小鼠体内的免疫原性。方法:以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作为缩合剂,介导TT与ADH反应,制备TTAH衍生物,2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)法测定TTAH的-AH衍生率;将14型肺炎球菌多糖(PS14)水解并用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶四氟化硼(CDAP)活化后直接与TT或TTAH结合,结合物经Sepharose 4 FF层析柱纯化后收集分配系数(KD)<0.2的样品并除菌过滤作为结合物原液,并对其生化指标、血清学特异性和小鼠免疫原性进行检测。结果:2种结合物原液游离糖含量均在1%以内,多糖回收率分别为PS14-TT:33.80%及PS14-TTAH:29.15%。与A组(多糖组)相比,2种结合物B组(PS14-TT)和C组(PS14-TTAH)能够诱导更高的抗PS14抗体水平(P<0.001)并具有剂次加强效应;与C组相比,B组能够诱导更高的抗PS14抗体水平且差异显著并具有统计学意义(P<0.05);2组结合物免疫3针后C组抗TT抗体水平高于B组,但差异无统计学意义,B组无剂次加强效应,而C组有剂次加强效应。结论:PS14-TT在小鼠体内诱导了较高的抗PS14抗体水平及较低的抗TT抗体水平,是较理想的多糖蛋白结合疫苗。
- 刘爱萍任珍芸刘佳王欣茹王玺李阿妮李燕婷胡浩吴兵谢贵林
- 关键词：肺炎球菌结合疫苗破伤风类毒素免疫原性
- 盐酸替利定的合成被引量：1
- 2012年
- 苯乙酸乙酯经亲核加成、脱羧制得α-亚甲基苯乙酸乙酯(4):另以巴豆醛与二甲胺在THF中反应制得1,3-二(二甲胺基)-1-丁烯(6)。4与6经缩合、分离、成盐制得盐酸替利定,总收率约15%(以苯乙酸乙酯计)。
- 李宏名吴林彬胡延雷曹嘉闫肃
- 关键词：镇痛药
- 肺炎球菌多糖衍生物中吡啶硼烷残留量核磁共振检测方法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的：建立核磁共振（nuclear magnetic resonance,NMR）方法检测肺炎球菌多糖衍生物中吡啶硼烷残留量的方法。方法：建立1H-NMR检测方法：脉冲程序为水峰压制,温度为298 K（25℃）。具体参数设置如下：中心频率约为4.7 ppm左右;图谱宽度为7 211 Hz;采样时间为2.272 s;弛豫延迟时间为2 s;扫描次数为512次;信号经傅里叶转换后加入1.0 Hz的窗口函数,检测结果使用Topspin 3.0软件进行处理。并验证该方法的专属性、检测限及耐用性。结果：该方法检测结果显示溶剂对所测组分无干扰;吡啶硼烷与肺炎球菌多糖衍生物有各自明显的特征峰,两者混合之后信号无交叉重叠,并都可以明显检测到各自的信号,说明方法专属性良好。吡啶硼烷浓度在1%~0.01%范围内均可以明显检测到Py-BH3信号,且S/N良好。最终最低检测限定为0.02%。改变试验温度化学位移及信噪比未发生明显变化,方法显示耐用性良好。结论：建立的1H-NMR检测方法检测肺炎球菌多糖衍生物中吡啶硼烷残留具有极高的专属性和耐用性,可用于肺炎球菌结合疫苗中吡啶硼烷残留量的测定。
- 李阿妮胡浩朱衍志罗树权于旭博吴兵刘方蕾刘爱萍赵志强谢贵林
- 关键词：核磁共振
- 丙二醇头孢曲嗪的合成
- 目的合成丙二醇头孢曲嗪方法7-ACA与5-巯基-1.2.3—三唑钾盐反应制备得到头孢曲嗪中间体7-TACA,再与D-（-）-对羟基苯甘氨酸邓钾盐缩合,得到甲醇头孢曲嗪,纯化后转成丙二醇头孢曲嗪。结果产品总收率32.4%,...
- 陈林石克金李江红张静霞曾志旋
- 关键词：7-ACA
- 文献传递
- 1型肺炎球菌多糖结合化学特性及结合物免疫原性探究被引量：2
- 2016年
- 目的:研究1型肺炎球菌多糖的氨基、羧基和羟基的结合反应活性,制备1型肺炎球菌多糖-蛋白质结合物,并研究其抗原性和免疫原性。方法:将天然多糖降解,用EDAC直接缩合法验证多糖分子上氨基的反应活性。采用EDAC缩合法,利用降解多糖分子上的羧基与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物(TTAH)的氨基和肼基缩合,以CDAP活化降解多糖的羟基,并与破伤风类毒素(TT)或TTAH直接结合,纯化结合物并对结合物抗原性和免疫原性进行分析。结果:天然多糖重均相对分子质量由4.175×105g·mol-1降为8.917×104g·mol-1,其结构、特异基团含量和抗原性未改变;降解多糖与EDAC混合后,相对分子质量未增加;3种方法制备的结合物,其多糖抗原性未发生变化,免疫原性显著高于天然多糖(P<0.05),3针免疫后Ig G抗体水平均有剂次加强效应,呈T细胞依赖型免疫应答。不同方法制备的结合物,免疫原性无显著差异。结论:采用本研究的方法,可降解1型肺炎球菌多糖并保留天然多糖特性;多糖分子上的氨基无结合反应活性,羧基和羟基有结合反应活性;EDAC缩合法与CDAP活化法所制备结合物,赋予了多糖典型的T细胞依赖型抗原的特征,不同方法及制备的结合物免疫原性无显著差异。间隔剂在本研究中对结合物免疫原性无影响。
- 胡浩朱学喆李献林罗树权李阿妮刘佳刘爱萍赵志强谢贵林
- 关键词：免疫原性
- α-氨基酸酯水解酶酶促合成β-内酰胺类抗生素的研究进展
- 2012年
- β-内酰胺类抗生素是临床应用最为广泛的一类抗感染药物,在我国医药工业中占有十分重要的地位。由于β-内酰胺类抗生素的酶法合成比传统化学法更节能环保、经济,国外已有企业开始大规模应用酶法合成工艺。加强酶法合成β-内酰胺类抗生素研究对于我国医药产业具有十分重要的现实意义。本文主要综述了α-氨基酸酯水解酶的研究进展,并展望它在合成β-内酰胺类抗生素中的应用。
- 屈凤李端华王辂易八贤
- 关键词：酶法合成
- 人肺炎球菌参考血清09CS的制备及其中13个肺炎球菌结合疫苗血清型抗体的IgG含量和调理吞噬滴度被引量：5
- 2014年
- 目的制备人肺炎球菌参考血清,对其中13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,PCV)血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)的抗荚膜多糖抗体Ig G含量和调理吞噬滴度进行定值。方法用23价肺炎荚膜多糖疫苗免疫20名健康成人,采集免疫后血浆,进行混合、去纤维蛋白原、过滤、分装、冻干,制备人肺炎球菌参考血清09CS。在WHO细菌性呼吸道病原参考实验室(University of Alabama at Birmingham,UAB)和兰州生物制品研究所有限责任公司(Lanzhou Institute of Biological Products,LIBP)实验室,采用WHO推荐的Pn PS ELISA法,以国际标准血清89SF为标准,对其中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量定值;以临时定值的09CS为标准,检测12份WHO校正血清、16份LIBP质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。同时以调理吞噬杀菌试验(opsonophagocytic killing assay,OPA)测定针对13个血清型的调理吞噬滴度。结果制备了5 000支(0.5 ml/支)冻干人肺炎球菌参考血清09CS,残留水分含量2.3%。确定了09CS中13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的临时定值;以09CS为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P<0.05);以09CS为标准检测的89SF的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差百分率的绝对值均<20%。确立了09CS中13价PCV血清型调理吞噬滴度。结论 LIBP成功制备了人肺炎球菌参考血清09CS,完成了对其中的13价PCV血清型抗荚膜多糖抗体Ig G含量的准确定值,并确定了调理吞噬滴度。
- 赵志强王欣茹石继春王浩刘方蕾乔瑞洁吴兵王弢何彦林叶强林纪胜谢贵林
- 关键词：肺炎球菌免疫球蛋白G
