国家自然科学基金(30972675)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：李文哲刘庆平王旭王惠国马彪更多>>
- 相关机构：大连大学大连医科大学辽宁师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金大连市科技计划项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Fut8基因通过促进VLA-4/VCAM-1表达影响B细胞发育被引量：5
- 2012年
- 目的探讨核心岩藻糖基化修饰对VLA-4/VCAM-1表达及B细胞发育的影响。方法通过RNA干扰技术使前B细胞(70Z/3)和基质细胞(ST2)的Fut8基因沉默,免疫沉淀和Western blot检测Fut8基因沉默效率,以细胞黏附实验和克隆形成实验分别研究Fut8基因对VLA-4/VCAM-1之间亲和力和对B细胞分化发育的影响。结果 Fut8基因沉默使VLA-4/VCAM-1之间的亲和力以及前B细胞和基质细胞之间的黏附作用降低,并使前B细胞的克隆形成能力明显下降。流式细胞仪分析结果也表明,Fut8-/-祖B细胞向前B细胞分化过程受阻。结论本实验揭示了Fut8基因调节VLA-4/VCAM-1之间结合能力以及前B细胞克隆形成的机理,为B细胞分化发育研究提供理论依据。
- 焦鑫艳马彪王旭刘庆平李文哲
- 关键词：VLA-4VCAM-1相互作用
- B细胞特异激活蛋白基因Pax5原核表达、纯化及多克隆抗体制备研究被引量：8
- 2011年
- 目的克隆人B细胞特异激活蛋白基因Pax5,并实现Pax5的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法从人淋巴瘤细胞株Raji提取总RNA,用RT-PCR扩增Pax5基因片段,克隆至pMD19-T载体,双酶切及基因测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pET28a中,并转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,进行SDS-PAGE分析,纯化后进行Western blot分析,用原核表达蛋白制备兔抗Pax5抗血清。利用免疫荧光染色法观察Raji细胞中的Pax5表达情况。结果克隆得到的目的基因片段大小与预期相符,测序结果与GenBank中报道的序列完全一致,成功构建了重组表达质粒pET28a-Pax5,并获得目的蛋白。Western blot检测原核表达Pax5蛋白相对分子质量约为42 000,经镍离子金属螯合柱纯化后,纯度达95%以上。兔抗Pax5抗血清ELISA效价可达1∶256 000。免疫荧光染色结果显示Raji细胞中Pax5高表达。结论本研究在原核系统中成功表达了Pax5重组蛋白,并制备多克隆抗体,为开发B淋巴细胞白血病诊断试剂盒提供了实验数据。
- 王旭逄越王惠国马彪刘庆平李文哲
- 关键词：PAX5原核表达
- Pax5对B细胞分化发育调控作用的研究进展被引量：5
- 2012年
- 转录因子Pax5在B细胞定向分化发育过程中发挥重要调控作用。B细胞定向分化发育相关的转录因子如PU.1、干扰素调节因子4(Interferon regulatory factor 4,IRF4)、IRF8和NF-κB结合在Pax5基因5’上游增强子区,转录因子EBF、STAT5结合在Pax5基因5’上游启动子区,从而共同促进Pax5基因的表达。表达的Pax5蛋白不仅通过IgH的V(D)J片段染色质的甲基化和乙酰化修饰来调节IgH V(D)J重排,并且通过B细胞特异性基因(mb-1、VpreB、λ5、CD19、BLNK等)表达调控B细胞的定向分化发育。若Pax5基因缺失,影响组蛋白H3-K9的修饰,导致B细胞向非B细胞分化。总之,Pax5在B细胞定向分化发育中起到重要调控作用。
- 马彪逄越王旭刘庆平李文哲
- 关键词：表观遗传调控
- E2A、EBF和PAX5在早期B细胞分化发育中的作用被引量：3
- 2011年
- 早期B细胞分化发育受到各种转录因子调控,特别是转录因子E2A、早期B细胞因子(EBF)及PAX5的调控尤为重要。本文以E2A、EBF与PAX5三个转录因子为综述对象,逐一阐述其在早期B细胞分化发育中的作用,并对3个转录因子在早期B细胞分化发育中的协同作用进行了综述。本文将为"B淋巴细胞分化发育调控机理研究"提供参考。
- 王旭逄越王惠国刘庆平李文哲
- 关键词：PAX5分化发育
- C-myc单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的制备与鉴定鼠抗C-myc蛋白单克隆抗体。方法利用C-myc蛋白做免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA法筛选、有限稀释法克隆、单克隆抗体Ig亚型鉴定,获得2株能够稳定分泌抗C-myc特异性抗体的杂交瘤细胞株,再将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔诱使小鼠产生腹水。结果获得2株可稳定分泌抗C-myc抗体的杂交瘤细胞株,命名为SHH-1H11,SHH-2A9,Ig亚型分别为IgG1亚类和IgM。细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5 120;小鼠腹水效价分别为1:64 000、1:32 000。结论制备的C-myc单克隆抗体仅与C-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,表明获得的单克隆抗体的特异性很高。
- 孙慧慧王旭王惠国谭建华朴敬爱朴君马彪刘庆平李文哲
- 关键词：C-MYC单克隆抗体
- B细胞受体核心岩藻糖基化调节成熟B细胞的信号转导
- 2016年
- 目的探讨核心岩藻糖基转移酶(Fut8)对成熟B细胞信号转导的影响。方法利用Fut8-siRNA逆转录病毒载体建立Fut8基因沉默成熟B细胞株(3-83-KD细胞),并将PLHCX-Fut8质粒导入3-83-KD细胞建立Fut8基因恢复成熟B细胞株(3-83-KD-Re)。用Real time-PCR、Western blot和HPLC法检测Fut8 mRNA、蛋白表达和Fut8酶活性,流式细胞仪和凝集素免疫印迹检测BCR的表达量和核心岩藻糖基化水平,Western blot技术检测细胞内酪氨酸磷酸化水平。结果与3-83细胞相比,3-83-KD细胞的BCR核心岩藻糖基化水平明显下降,而3-83-KD-Re细胞其表达得到恢复。Fut8基因沉默使3-83-KD细胞BCR介导的信号传导明显减弱,而3-83-KD-Re细胞的信号传导恢复正常。结论 Fut8修饰的核心岩藻糖基化在BCR介导的细胞信号转导过程中发挥重要的调节作用。
- 于蕊刘红霞孙世杰王惠国李文哲
- 关键词：SIRNA信号转导
- 阻断核心岩藻糖基化修饰对小鼠前B细胞信号传导能力的影响
- 2014年
- 目的 观察阻抑核心岩藻糖基化修饰对前B细胞信号传导的调节作用.方法 利用逆转录病毒包装技术建立核心岩藻糖转移酶Fut8基因沉默前B细胞株（70Z/3-Fut8-RNAi细胞）.用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot检测Fur8 mRNA、蛋白表达和细胞内信号分子的酪氨酸磷酸化水平.结果 成功构建重组pSINsi-hU6-Fut8 siRNA质粒,逆转录病毒包装后病毒滴度可达2.1×10^5 CFU/ ml.Real-time PCR及Western blot检测结果表明70Z/3-Fut8-RNAi细胞的Fut8基因和蛋白表达明显下降,蛋白表达水平下调70％ - 80％,mRNA水平下调70％ -80％,以及pre-BCR介导的细胞信号传导,即CD79a及BTK磷酸化显著下降.结论 成功构建70Z/3-Fut8-RNAi细胞株,Fut8修饰的核心岩藻糖基化可能在早期B细胞的细胞信号传导过程中发挥重要的调节作用.
- 李志焦鑫艳杨岩徐莲花张向文金锦花李文哲
- 关键词：小干扰RNA细胞信号传导
- 凤仙花水提物对小鼠腹泻抑制作用的研究被引量：1
- 2017年
- 为研究凤仙花水提物对实验动物胃肠道平滑肌的影响并对凤仙花的止泻机制进行探究。按照灌胃的方式给予小鼠番泻叶煎剂诱导小鼠腹泻模型,并根据观察腹泻潜伏期及腹泻次数等指标来评价凤仙花水提物的止泻作用;依次进行小鼠的胃排空和小肠推进实验,通过观察现象探讨其可能的作用机制。结果表明凤仙花水提物对番泻叶煎剂所导致的小鼠泄泻以及小鼠的小肠推进和胃排空有对抗作用。说明凤仙花水提物对小鼠腹泻有抑制作用,其中凤仙花水提物中可能具有止泻成分,其止泻机制之一为抑制肠胃运动。
- 王惠国汤红翠秦海宏贾琳钰龙文月冯宝民
- 关键词：凤仙花抗腹泻胃排空小肠推进
