教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0797)
- 作品数：18 被引量：56H指数：4
- 相关作者：李刚卢建溪陈伟朱明芬李永伟更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院中山大学江西省中医院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”广东省教育厅“千百十工程”优秀人才培养基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢性乙型病毒性肝炎抗病毒治疗方案的新探索被引量：17
- 2012年
- 慢性乙型病毒性肝炎（CHB）是难治性疾病,由于乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（cccDNA）存在于受感染的肝细胞核中,目前两大类抗病毒药物：核苷（酸）类药物、干扰素,任何一类都不能完全清除乙型肝炎病毒,达到根治乙肝的目的,而仅能阻止疾病向肝硬化、失代偿性肝硬化、终末期肝病、肝癌、死亡进展,提高患者生活质量,延长生存期[1]。
- 李莉孙海霞李刚
- 关键词：慢性乙型病毒性肝炎抗病毒药物失代偿性肝硬化难治性疾病共价闭合环状终末期肝病
- 一种新的乙型肝炎病毒全基因组克隆技术的建立被引量：2
- 2006年
- 目的建立一种乙型肝炎病毒(HBV)全基因组扩增及克隆的新方法。方法设计含SalⅠ、NotⅠ酶切位点的引物,用一片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切后将PCR产物克隆入pBlueScript-(SK-)载体,进行HBV全基因组序列测定。结果用此方法成功获得35例HBV全基因组DNA序列。同时以重组质粒为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.6bp/kb。结论此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法。
- 李莉卢建溪谢冬英徐启桓朱明芬陈伟李刚
- 关键词：基因组聚合酶链反应
- 阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶水平的变化
- 2008年
- 目的研究新药阿德福韦（ADV）治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平的变化情况，从而指导临床用药。方法采集16例慢性乙型肝炎（CHB）患者用ADV治疗前血清，即基线（BL）血清，以及持续服药12、16、28．40、48、52、68、80、92周共10个时段的系列血清。用荧光定量PCR法检测其HBV DNA的水平。用全自动生化仪检测其ALT的水平。结果从BL到48周时段，HBV DNA中位数显著下降；在52周，HBV DNA中位数出现反弹；从52至92周时段，HBV DNA中位数再次下降。16例不同时段血清ALT中位数的变化与HBV DNA中位数变化一致。ADV治疗12周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．34lg拷贝／ml，无HBV DNA阴转、HBeAg血清学转换；治疗28周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．91lg拷贝／ml，有2例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗40．48周时，HBV DNA中位数较基线分别显著下降了3．83、3．95lg拷贝／ml，有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗52周时。HBV DNA中位数较基线下降了2．90lg拷贝／ml，出现反弹，但仍有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗68、80、92周时，HBV DNA中位数较基线显著下降了3．51、3．81、4．01lg拷贝／ml，分别有4、6、6例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换。16例患者接受ADV治疗的两年中，有9例患者分别从16、28、40周开始HBV DNA的水平显著下降；7例患者HBV DNA的水平下降但不显著。结论阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中，HBV DNA及ALT中位数的变化情况基本一致。52周时段HBV DNA水平出现反弹。提示52周可能是抗病毒的关键时段。
- 卢建溪王强陈文思谢东英徐启桓陆伟伦李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：肝炎乙型慢性阿德福韦聚合酶链反应
- 阿德福韦酯抗乙型肝炎病毒的耐药研究进展被引量：4
- 2008年
- 阿德福韦酯是继拉米夫定后抗乙型肝炎病毒(HBV)的又一种核苷类似药物,属于逆转录酶抑制剂。阿德福韦酯抗HBV的耐药变异率低,目前发现的耐药位点主要为rtN236T和rtA181V/T。如果阿德福韦酯发生耐药,可导致HBV DNA的反弹及肝功能异常,因此对阿德福韦酯耐药的预防及耐药的处理显得尤为重要。目前对耐药的基础研究主要在分子水平,而临床研究包括联合用药,药物替代疗法和免疫调节等。
- 熊晓佳李刚
- 关键词：阿德福韦酯乙型肝炎耐药性
- 两种HBV全基因组克隆方法的比较
- 2008年
- 目的通过比较血清HBVDNA水平对一片段PCR法和两片段PCR法这两种不同方法的HBV全基因组克隆效率的影响,选择出合适的HBV全基因组克隆技术,供后续的HBV的基础和临床研究。方法采集了乙型肝炎患者85份血清,分别用本研究建立的一片段PCR法及两片段PCR法扩增HBV全基因组,经双酶切鉴定后将PCR产物克隆入载体,进行HBV全基因组序列测定。同时用实时荧光定量PCR法检测上述85份血清的HBVDNA滴度。结果本研究建立的一片段法扩增成功需要的血清HBVDNA浓度高于二片段法,两种方法扩增的效率比较为一片段方法扩增的成功率低于二片段方法(P<0.05)。一片段方法的保真性:核苷酸的人为突变率为1.13bp/kb。灵敏度:为102个初始模板,大于103的重组质粒DNA80%可以成功扩增,浓度低于该值的扩增效率比较低。结论血清HBVDNA水平对两种扩增方法的成功率有一定影响,滴度高低是选择合适PCR扩增方法的依据。HBVDNA滴度大于103copies/ml的样本,可选用一片段PCR法的全基因组扩增、克隆技术,而对HBVDNA滴度小于103copies/ml样本,则可选用两片段法的全基因组扩增、克隆技术。本研究建立的一片段PCR法扩增HBV全基因组克隆的技术是一种值得推荐的好方法,但需进一步优化。
- 卢建溪李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：基因组聚合酶链反应
- 丙型肝炎病毒RNA含量与抗-HCV及ALT的关系探讨被引量：7
- 2006年
- 目的了解丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)与抗丙肝病毒抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)的关系。方法83份确诊为丙肝的住院患者样本作观察组,95份健康体检人群样本作对照组,用荧光定量逆转录聚合酶反应(FQ-RT-PCR)检测这两组样本的HCV RNA含量,并同时采用ELISA法检测抗-HCV,用全自动生化检测仪测定ALT水平。结果观察组HCV RNA含量高于80 copy／ml者67份,抗-HCV阳性者64份,经进一步相关性分析,两者有很好的相关性(r=0．587,P=0．002);83份病例中有58份ALT异常,其异常率随HCV RNA含量的升高而增加。经统计学分析,ALT异常例数和正常例数差异有显著性(P<0．01);ALT水平和HCV RNA含量无相关性(r=0．175,P=0．095);而ALT异常率与HCV RNA含量呈正相关(r=0．903,P=0．036)。结论HCV RNA含量与抗-HCV同时检测可提高临床对丙型肝炎的诊断。HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标,结合ALT的结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的炎症状态。FQ-RT-PCR法检测HCV RNA具有非常好的临床应用价值。
- 陈文思李刚曹红
- 关键词：丙型肝炎病毒丙氨酸氨基转移酶聚合酶链反应
- 含阿德福韦耐药基因的HBV全基因组载体的构建及鉴定
- 2008年
- 阿德福韦酯口服后可迅速水解为阿德福韦而发挥抗病毒作用。阿德福韦在体外具有抗HBV、其他逆转录病毒和疱疹病毒等广谱抗病毒活性。对HBV的抑制效果不如拉米夫定和恩替卡韦。但是阿德福韦可作为上述两种药物耐药后的备选药物。同其他核苷类药物一样，阿德福韦基因耐药后出现的序列变异也在HBV多聚酶的逆转录酶区，但位点不同。rtN236T和rtAl81V变异是与阿德福韦耐药有关的常见变异位点。耐药的产生会导致氨基转移酶、病毒载量的升高和病情的进展，但这些变化的机制并不清楚。本研究构建含阿德福韦耐药位点的HBV全基因组质粒，以建立稳定的耐药细胞模型，为进一步研究耐药机制等奠定基础。
- 项凤梅卢建溪江一平李永伟王强刘旭东李刚
- 关键词：基因突变抗药性阿德福韦酯
- 成纤维细胞激活蛋白在乙肝相关性肝癌中的表达及其临床意义被引量：3
- 2011年
- 目的 研究成纤维细胞激活蛋白（FAP）在乙肝相关性肝癌中的表达,探讨其临床意义.方法 采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测33例乙肝相关性肝癌患者手术切除肝癌组织、癌旁组织及远隔相对正常肝组织及13例正常肝组织FAP表达情况,同时采用荧光定量PCR方法检测其mRNA表达差异.结果 FAP mRNA在肝癌组织、癌旁组织以及远隔相对正常肝组织中均有表达,相对于对照组正常肝组织的差异倍数值分别为5.14 ±6.69、1.58±0.96、1.63 ±0.94,三者比较差异有统计学意义（F=4.401,P＜0.05）；FAP mRNA的差异倍数值在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期肝癌中分别为2.89±3.35、4.15±4.69、10.09 ±9.51,在高、中、低分化肝癌中分别为1.62±1.74、3.84±3.79、11.26±13.34,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 FAP可能在乙肝相关性肝癌的发生、发展中发挥重要作用,可作为乙肝相关性肝癌分化程度及预后判断的指标.
- 张烨琼卢建溪孙海霞舒欣曹红潘兴飞徐启桓李刚
- 关键词：肝细胞肝炎病毒乙型成纤维细胞生长因子
- miR-196a-2基因多态性与慢性丙型肝炎抗病毒治疗疗效的关系被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨miR-196a-2 SNP位点rs11614913与慢性丙型肝炎患者对长效干扰素联合利巴韦林治疗疗效的相关性.方法 选择接受聚乙二醇干扰素α-2a（Peg-IFN-α-2a）或α-2b（PegIFN-α-2b）联合利巴韦林（RBV）抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者共139例,其中持续病毒学应答（SVR）组82例,无病毒学应答（NVR）或复发组57例,采集静脉血并进行DNA提取,采用聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性（PCR-RFLP）方法 对miR-196a-2进行SNP分型,组间差异进行分析比较.结果 位于miR-196a-2 rs11614913位点的CT基因型与TT基因型两组间比较差异具有统计学意义[P=0.006,A值=3.5（1.402-8.737）],CC基因型与TT基因型在两组间比较差异有统计学意义[P值=0.011,A值=4.000（1.330-12.031）].T等位基因与C等位基因频率在两组间比较差异有统计学意义[P=0.008,A值=1.926（1.185-3.131）].结论 位于miR-196a-2基因区rs11614913位点的多态性与慢性丙型肝炎患者抗病毒疗效具有相关性,T等位基因或TT基因型与SVR相关,而C等位基因或CC基因型与NVR或复发相关.
- 洪晓绿曹红赵方潘兴飞张卡徐启桓赵志新李刚
- 关键词：基因多态性肝炎病毒等位基因
- 阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎过程中乙型肝炎病毒基因型变化情况分析被引量：2
- 2009年
- 目的研究阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)治疗慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)过程中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型变化情况。方法选取16例应用ADV治疗的CHB患者作为研究对象,用一片段PCR法扩增了用药前(baseline,BL)、用药后第28周、52周、92周时的HBV全基因组,克隆后进行全基因组序列测定及基因型分型。结果16例CHB患者治疗开始时(baseline,BL)的HBV基因型分布为:B型9例,C型7例,未发现A、D、E、F基因型。但有5例患者在接受ADV治疗后的28周、52周、92周,基因型发生了变化即从B型变为C型,或从C型变为B型。结论本研究发现,在ADV治疗CHB过程中,31.25%患者体内的HBV基因型发生了变化。这种变化产生的原因及其生物学意义,有待于进一步研究。
- 卢建溪巩伯梁阳莉梅明珠李刚
- 关键词：乙型肝炎病毒基因型阿德福韦酯
