教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0792)
- 作品数：4 被引量：17H指数：4
- 相关作者：杨霞高国全蔡卫斌杨中汉李朝阳更多>>
- 相关机构：中山大学广州市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 突变型K5重组蛋白抑制小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的作用被引量：4
- 2008年
- 目的:体内实验观察人纤溶酶原K5缺失突变体Ⅰ(K5 mut1)对HepA小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。方法:大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5 mut1蛋白,SDS-PAGE和Western blot-ting方法鉴定其表达;建立皮下种植肝癌小鼠模型,腹腔注射不同剂量K5 mut1重组蛋白,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。结果:SDS-PAGE及Western blotting鉴定获得K5 mut1纯化蛋白;K5 mut1剂量依赖性地抑制小鼠肝癌(HepA)实体瘤生长,不同剂量K5 mut1治疗组肝癌组织MVD低于对照组,并随K5 mut1用药剂量增加而降低。结论:K5 mut1具有抑制小鼠肝癌生长的作用,抑制肿瘤血管生成可能是K5 mut1抑制肿瘤生长的主要机制。结果提示K5 mut1具有治疗肝癌的潜在临床价值。
- 杨霞王青松程锐李朝阳蔡卫斌杨中汉李民友何光耀高国全
- 关键词：纤维蛋白溶酶原新生血管化病理性
- 广州市群体性食物中毒事件中诺如病毒分子流行病学分析被引量：7
- 2008年
- 【目的】初步了解广州市社区食物中毒事件中诺如病毒的分子流行病学情况。【方法】在2003年10月至12月期间,从5个不同流行现场,采集急性期胃肠炎患者的粪便标本76份,用RT-PCR对标本中的诺如病毒核酸进行扩增,将阳性产物回收、纯化并测序,与GenBank中的相关序列进行比较分析,绘制系统发生树。【结果】76份样品中共检出阳性36份,阳性率为47.37%。从5个流行现场获得5个代表株,分别为DX1106、PY1106、HM1121、PY1202和HD1219,其中DX1106与PY1202的序列完全一致,而其他毒株间的序列同源性在35%～85%之间。系统发生树分析发现5个代表株都属于GⅡ组诺如病毒,但分属于不同的基因型。其中DX1106与PY1202株属于GⅡ-3型,HM1121和HD1219株属于GⅡ-4型,PY1106株介于GⅡ-6、7、8型之间,尚不能确定型别。【结论】广州市存在诺如病毒引起的食物中毒,流行优势株为GⅡ组,但其基因型别存在多样性。
- 吴新伟杨霞蒋力云沈纪川谢华萍李向忠伍业健刘于飞高国全
- 关键词：诺如病毒食物中毒分子流行病学系统发生树
- 纤溶酶原K5抗血管增生活性依赖其完整Kringle结构域被引量：6
- 2006年
- 根据K5蛋白(Pro451—Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5 mut1(Cys461—Cys540,保留K5 kringle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5mut2(Cys482—Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和生物活性测定.K5 mut1蛋白特异性抑制人视网膜微血管内皮细胞增殖,且活性强度是完整的K5蛋白2倍;K5mut2对人视网膜微血管内皮细胞无显著抑制作用.结果提示,完整的Kringle结构(包含3个二硫键)是维持人纤溶酶原K5抗血管增生活性的必需结构域,而K5分子中Kringle结构域外的N端和C端氨基酸臂则并非其活性所必需.
- 李朝阳蔡卫斌杨中汉杨霞宋志宏周世豪李明友刘祖国高国全
- 关键词：纤溶酶原KRINGLE缺失突变体
- 人纤溶酶原K5突变体在大肠杆菌中的优化表达被引量：4
- 2008年
- 【目的】提高K5突变体(mK5)在原核系统的单位表达量。【方法】调整可能影响表达的参数:抗生素浓度、pH、A600值、IPTG终浓度、诱导时间、诱导温度,同时固定其它参数。通过电泳分析,获得mK5在原核系统pET22b-BL21的最优表达条件;组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得mK5蛋白,SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定mK5蛋白;MTT法分析mK5对人视网膜毛细血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响。【结果】优化后的表达条件为:最适细菌培养温度为37℃,最佳抗生素浓度为50μg/mL羧苄青霉素,最适pH值为7.0,在A600为0.9～1.0时加入终浓度为1.0mmol/L的IPTG为最佳诱导条件,37℃诱导10h为最佳诱导时间;优化条件后mK5纯化蛋白得率为21mg/L,产量较优化前(15mg/L)提高近30%;mK5特异性地抑制HRCEC的增殖,IC50=40nmol/L。【结论】本研究确定了mK5蛋白诱导表达的最适参数,并获得具有生物活性的高纯度、高表达量的重组蛋白,为工业化大规模发酵生产提供了基本参数。
- 李朝阳温南杨中汉蔡卫斌李明友刘祖国高国全杨霞
- 关键词：缺失突变体血管新生
