天津市卫生局科技基金(07kz47)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：李兰英于德民宋丹毋中明张绍敏更多>>
- 相关机构：天津医科大学代谢病医院更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染被引量：1
- 2008年
- 目的:构建并转染含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB(rhPDGF-BB)非融合型表达载体,为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础。方法:从人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中分离总RNA,行RT-PCR获得rhPDGF-BB cDNA,构建克隆质粒pMD19-T/rhPDGF-BB,经测序正确后,再将该目的片段与真核表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs连接,转化E.coli DH5α感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体,然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)并用免疫组化染色法鉴定。结果:PCR获得长度为681bp的目的片段,经pSELECT-GFPzeo-mcs载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列(NM-033016)完全匹配。结论:成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达。
- 张绍敏毋中明宋丹李兰英于德民
- 关键词：绿色荧光蛋白质类仓鼠卵巢转染
