江苏省高校自然科学研究项目(09KJA170001)
- 作品数：7 被引量：20H指数：3
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- 相关机构：淮海工学院江南大学大连海洋大学更多>>
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- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程更多>>
- 一株海洋嗜盐菌Halomonas sp.TN2-3的分离筛选和鉴定
- 嗜盐菌作为一类新型的、极具应用前景的极端微生物资源,近年来受到人们的广泛关注,它们具有极为特殊的生理结构和代谢机制,同时还产生了许多具有特殊性质的生物活性物质,对它的研究既具有理论意义,又有应用价值。本研究从盐场筛选获得...
- 王淑军吕明生焦豫良刘姝房耀维黄秋
- 关键词：嗜盐菌极端微生物
- 文献传递
- 多结构域酶的结构域进化关系被引量：1
- 2012年
- 近年来随着生命科学新技术、新方法的涌现,酶蛋白结构和功能研究逐渐深入。具有多结构域的酶蛋白中各个结构域常具有独立的催化或结合底物的功能,在重组酶和组合生物合成研究中具有极大的研究和应用价值。这些结构域功能和组织方式的多样性,是研究分子进化的基础。对结构域进行进化分析对于研究多结构域酶的进化过程、功能相近酶之间的关系,以及对酶的分类鉴定等有重要意义。本文从结构域的重复性、结构域的水平基因转移和结构域的重组等方面出发,对多结构域酶中结构域之间进化关系的研究成果进行综述。
- 焦豫良王淑军吕明生房耀维刘姝
- 关键词：分子进化水平基因转移
- 一株来自深海的嗜热球菌产高温蛋白酶的研究
- 对深海古菌Thermococcus sp.HJ21产高温蛋白酶的酶学性质进行初步研究,研究表明酶的最适作用温度和p H分别为100℃和p H8.0。100℃及以下酶的热稳定性较好,在80℃和100℃保温2.5h后该酶仍具...
- 吕明生王淑军刘姝房耀维陈丽焦豫良张牧晗
- 关键词：高温蛋白酶酶学性质
- 文献传递
- 一株海洋嗜盐菌Halomonas sp.TN2-3的分离筛选和鉴定
- 嗜盐菌作为一类新型的、极具应用前景的极端微生物资源,近年来受到人们的广泛关注,它们具有极为特殊的生理结构和代谢机制,同时还产生了许多具有特殊性质的生物活性物质,对它的研究既具有理论意义,又有应用价值。本研究从盐场筛选获得...
- 王淑军吕明生焦豫良刘姝房耀维黄秋
- 关键词：嗜盐菌极端微生物
- 文献传递
- Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶Asp186定点突变对酶活性的影响被引量：1
- 2012年
- 为确定超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶(TSA)中特定氨基酸及所在位点与酶活性间的关系,以含TSA基因的pEt-28a-His6质粒为模板,利用定点突变技术,将第186位点的天冬氨酸(Asp)突变为天冬酰胺(Asn),突变子转化至E.coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后的酶活性,定点突变后的TSA无酶活性;采用DNAStar和Deepview蛋白分析软件,预测突变前后TSA蛋白的二级结构和三级结构,结果表明Thermococcus siculi HJ21 α-淀粉酶的186位点对维持TSA的酶活性具有重要意义,它的突变导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变。
- 吕明生杨帆胡建恩房耀维焦豫良王淑军刘姝
- 关键词：Α-淀粉酶定点突变酶活性
- 耐高温α-淀粉酶高密度高表达发酵条件的优化被引量：10
- 2012年
- 通过摇瓶实验对产耐高温α-淀粉酶的重组菌E.coli BL21的高密度高表达发酵条件进行研究。考察不同培养基和不同发酵条件对该菌株产耐高温α-淀粉酶的影响,并利用正交试验进行优化。结果表明:在葡萄糖0.5g/L,酵母粉15g/L,pH6.5,诱导时机为接种后发酵4h,诱导时间为6h,IPTG添加量为0.8mmol/L,接种量为体积分数3%的优化条件下,该重组菌发酵液菌体生物量为原来的1.29倍,酶活力达到8.754U/mL,是原来的1.55倍,目的蛋白的表达量也为原来的1.24倍。
- 胡建恩曹茜杨帆房耀维王淑军吕明生葛亮李瑛
- 关键词：耐高温Α-淀粉酶发酵培养基发酵条件
- 热球菌HJ21高温α-淀粉酶基因克隆、表达及性质研究被引量：3
- 2011年
- 通过简并引物扩增热球菌(Thermococcus siculi)HJ21高温α-淀粉酶保守区域之间的序列,再利用Site-finding技术获得两端未知序列。构建了在N端添加了His6标签的表达载体pEt-28a-His6-THJA后转化E.coli,在IPTG诱导下表达。进一步纯化后SDS-PAGE电泳检测达到电泳纯,重组酶分子量为50 KDa。重组酶最适作用温度和pH值分别为90℃,pH5.0。重组酶在pH为5.5时最稳定;K+,Sr2+,Mg2+,Na+对α-淀粉酶活力的促进作用不显著,Cu2+,Pb2+,Hg2+,Zn2+,N-溴代丁酰亚胺和三氯乙酸对该酶有显著抑制作用。
- 王淑军吕明生秦松陆兆新房耀维邓祥元林谦刘红飞
- 关键词：基因克隆酶学性质
- 深海高温淀粉普鲁兰酶异源表达及酶活分析
- 2011年
- 深海热液口厌氧古菌Thermococcus siculi HJ21中的高温淀粉普鲁兰酶进行分子进化树系分析,并在大肠杆菌中通过pMal-c2x载体表达并纯化其N端催化结构域。通过融合表达,在N端催化结构域的N端融合有麦芽糖结合蛋白MalE。对该融合蛋白的α-淀粉酶和普鲁兰酶活性进行了实验分析。融合蛋白的两种酶活的最适温度均为100℃,淀粉酶和普鲁兰酶活性的最适pH值分别为5和6,比活力分别为6.5和11.5 U/mg。结果表明,高温淀粉普鲁兰酶的α-淀粉酶活性相对较弱,其C端578个氨基酸构成的区域非两种酶活性所必需的结构。本研究中获得的高温淀粉普鲁兰酶融合蛋白在工业酶法制糖中可以进一步和高温α-淀粉酶配合使用。
- 焦豫良王淑军吕明生房耀维刘姝
- 关键词：异源表达酶活分析
- 深海古菌Thermococcus siculi HJ21高温普鲁兰酶基因的克隆及表达被引量：5
- 2010年
- 根据NCBI上公布的普鲁兰酶基因的保守序列设计简并引物,以Thermococcus siculi HJ21基因组DNA为模板进行PCR,得到T.siculi HJ21普鲁兰酶的基因,测序后通过Blast(NCBI)数据库比对和分析表明扩增基因有一个4056bp、编码1351个氨基酸的开放阅读框,为一新的普鲁兰酶基因。将该基因插入表达载体pET28a,并转化Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导,测定普鲁兰酶比活力。重组转化子的细胞破碎液有高温普鲁兰酶活性,SDS-PAGE电泳结果显示出分子质量约为150kD的特异性条带。
- 王淑军吕明生李华钟徐金利焦豫良房耀维刘姝
- 关键词：THERMOCOCCUS普鲁兰酶基因PCR
- 海洋耐高温酸性α-淀粉酶水解玉米淀粉的研究被引量：1
- 2012年
- 为开发适用于工业生产的新型酶制剂,以实验室自主构建的基因工程菌所产的新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶为液化酶,以玉米淀粉液化后的DE值为指标,研究影响玉米淀粉的液化的因素,确定该酶水解玉米淀粉的最佳工艺条件。新型海洋耐高温酸性α-淀粉酶最佳的工艺条件为温度85℃、时间90 min、粉浆浓度250 g/L、酶用量32 U/g淀粉。
- 李瑛吕明生王淑军李华钟房耀维焦豫良刘姝
- 关键词：玉米淀粉酶解
