国家自然科学基金(81000886)
- 作品数：7 被引量：48H指数：4
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- miR-26a mimics转染人肝癌细胞株HepG2的表达蛋白质组分析被引量：4
- 2011年
- 目的:通过分析microRNA-26a(miR-26a)mimics转染对人肝癌细胞株HepG2表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性。方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2,经miR-26a mimics转染48 h后进行细胞周期分析,并裂解转染72 h的HepG2细胞提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定。结果:HepG2细胞经miR-26a mimics转染后细胞增殖受到抑制;其蛋白2-DE图谱与对照组比较,差异表达超过2倍的蛋白斑点有11个。其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有8个蛋白斑点为表达下调。质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C氧化酶5a、细胞周期蛋白E2、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白。结论:miR-26a可能通过影响上述蛋白分子的表达,直接或间接地调控HepG2肝癌细胞的增殖、分化和死亡,以发挥其抗癌作用。
- 刘友平李娟代荣阳段春燕陈绍坤严冬梅陈川宁李洪
- 关键词：MIMICS微小RNAHEPG2细胞蛋白质组
- 未折叠蛋白反应通过自噬抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡被引量：4
- 2011年
- 目的:研究未折叠蛋白反应对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:在采用二硫苏糖醇和衣霉素诱导未折叠蛋白反应的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析未折叠蛋白反应对顺铂诱导的肝癌细胞凋亡的影响及其机制。结果:二硫苏糖醇和衣霉素预处理促进顺铂诱导的自噬反应并抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡,抑制自噬反应明显削弱二硫苏糖醇和衣霉素预处理对顺铂作用下肝癌细胞的保护作用。结论:未折叠蛋白反应能够通过促进自噬抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。
- 代荣阳段春燕刘友平严冬梅李洪
- 关键词：未折叠蛋白反应自噬顺铂凋亡肝癌细胞
- 真核起始因子2α的磷酸化抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡被引量：1
- 2013年
- 目的探讨真核起始因子2α（eW2α）的磷酸化对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法将肝癌细胞随机分为对照组和实验组，在用突变载体eIF2αS51A转染和小分子抑制剂salubrinal改变实验组细胞在顺铂作用条件下eIF2cL磷酸化的基础上，用流式细胞和Westerm blot分别检测细胞凋亡的百分率和细胞凋亡的分子标志物。多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验。结果顺铂诱导肝癌细胞eIF2α发生51位丝氨酸磷酸化。在突变载体转染条件下，顺铂（10ug／ml）诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在24h凋亡的平均百分率分别为21．7％±1．5％和50．7％±2．1％（t=19．454，P〈0．05）；顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在24h凋亡的百分率分别为21．0％±1．0％和57．3％±2．1％（t=27．250，P〈0．05）。在抑制剂作用条件下，顺铂（15μg／ml）诱导对照组和实验组SMMC～7721细胞在36h凋亡的百分率分别为50．3％±2．5％和16．3％±2．1％（t=18．031，P〈0．05）；顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在36h凋亡的百分率分别为42．0%±2．6%和12．0%±2．％（t=15．667，P〈0．05）。同时，Westem blot检测显示eIF2α的磷酸化抑制顺铂诱导的凋亡蛋白抗多聚ADP-核糖聚合酶的剪切。结论eIF2α的磷酸化在肝癌细胞抵抗顺铂介导的凋亡中起重要作用。
- 冯春红陈润陈绍坤李娟段春燕刘友平李洪代荣阳
- 关键词：细胞凋亡顺铂
- miR-221／222在肝癌细胞抵抗内质网应激凋亡中的作用被引量：3
- 2011年
- 目的研究内质网应激对miR221／222的调控及其在肝癌细胞抵抗内质间应激诱导细胞凋亡中作用。方法采用miR221／222抑制物和miR221／222类似物分别阻断或模拟内源性miR-221／222的功能，并利用Western blot和流式细胞技术分析内质网应激条件下miR-221／222对肝癌细胞周期和凋亡的调控作用。结果内质网应激诱导miR221／222表达下凋，miR221／222类似物和抑制物分别抑制和促进内质网应激诱导的p27Kip1表达上调，干扰p27^kipl不仅抑制了内质网应激诱导的肝癌细胞G0／G1期阻滞，也促进了内质网应激介导的肝癌细胞凋亡。结论内质网应激诱导miR-221／222下调能够通过促进p27^Kipl表达对内质网应激条件下肝癌细胞周期和凋亡起重要调控作用。
- 刘友平段春燕陈川宁严冬梅陈绍坤李娟李洪代荣阳
- 关键词：肝细胞内质网应激细胞周期MIR
- 阻断p38丝裂原活化蛋白激酶在细胞空泡形成中的作用
- 2014年
- 目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路与细胞空泡形成的关系。方法应用茴香霉素、放线菌酮、p38MAPK抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125处理HepG2、LM3、QBC939、Hela和A549细胞,光学显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞空泡化情况;Western blot法检测p38MAPK等通路相关分子的表达水平;内质网红色荧光探针标记内质网,激光共聚焦显微镜观察内质网结构变化;溶酶体红色荧光探针标记溶酶体,激光共聚焦显微镜观察溶酶体荧光染色情况。结果 (1)茴香霉素对HepG2细胞空泡有消除作用。(2)茴香霉素通过活化p38MAPK消除细胞空泡。(3)阻断p38MAPK诱导多种肿瘤细胞空泡形成。(4)阻断p38MAPK介导的空泡形成破坏内质网结构的整体性。(5)阻断p38MAPK介导的空泡形成具有可逆性。结论 p38MAPK通路在调节细胞空泡形成中发挥了重要作用。
- 张春燕冯春红敬健雄段春燕刘友平夏先明李洪代荣阳陈绍坤
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶内质网SB203580
- PI3K/Akt调控内质网应激对GRP78的诱导被引量：32
- 2011年
- 目的:研究内质网应激条件下PI3K/Akt信号通路对HEK293细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平的调控作用。方法:采用PI3K抑制剂LY294002、Akt1失活型突变载体Akt1(K179M)及Akt siRNAs阻断内质网应激介导的Akt活化,采用Akt激活型突变载体Myr-Akt过度激活内质网应激介导的Akt活化,并利用RT-PCR和Western blotting技术分析内质网应激条件下PI3K/Akt信号途径对HEK293细胞中GRP78表达水平的调控作用。结果:LY294002、Akt1(K179M)及Akt1 siRNA均明显抑制了内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt1明显促进内质网应激对GRP78的诱导。Myr-Akt2/3及Akt2/3 siRNA对GRP78的诱导均无影响。PI3K/Akt信号通路阻断或过度激活对GRP78 mRNA水平的诱导无影响,但是对GRP78的降解有显著影响。结论:HEK293细胞中,PI3K/Akt通过蛋白稳定性调节促进内质网应激对GRP78的诱导。
- 刘友平严冬梅陈川宁段春燕陈绍坤李洪代荣阳
- 关键词：PI3K/AKT内质网应激HEK293细胞
- Akt和胞外信号调节激酶通路间的信号交流对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控被引量：4
- 2010年
- 目的研究内质网应激介导的磷脂酰肌醇3激酶（P13K）／Akt和丝裂原活化蛋白激酶（MEK）／胞外信号调节激酶（ERK）途径间的信号交流及其对内质网应激条件下肝癌细胞周期的调控作用。方法采用P13K抑制剂LY294002、Akt激活型突变载体myr-Akt和MEK抑制剂U0126分别阻断或激活内质网应激介导的Akt和ERK活化，并利用Westernblot和流式细胞技术分析内质网应激条件下P13K／Akt和MEK／ERK途径间的信号交流及其对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B和HepG2细胞周期的调控作用。数据处理采用Sperman等级相关分析，P〈0．05为差异有统计学意义。结果阻断P13K／Akt明显促进内质网应激介导的MEK／ERK活化，而过度激活P13K／Akt则抑制内质网应激介导的MEK／ERK活化。阻断MEK／ERK对内质网应激介导的P13K／Akt活化无影响。持续活化的Akt突变载体myr—Akt和MEK抑制剂U0126均明显抑制了内质网应激诱导的肝癌细胞G0／G1期阻滞。结论P13K／Akt和MEK／ERK信号途径在内质网应激肝癌细胞中存在信号交流，该信号交流对细胞周期起重要调控作用。
- 严冬梅代荣阳段春燕陈绍坤刘友平陈川宁李洪
- 关键词：细胞周期胞外信号调节激酶AKT
