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稳定表达rhPDGF-BB的CHO细胞系的建立及其生物学特性研究被引量：2: 2009年; 目的:建立稳定表达人血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)全长的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞系,并检测表达产物的生物活性。方法:通过脂质体瞬间转染的方法将含有rhPDGF-BB全长的质粒转染CHO细胞系。利用抗生素筛选的方法使转染阳性的细胞扩增和单克隆化,进一步稳定传代。通过Western印迹法挑选高表达克隆,进而使用MTT法检测转染前后细胞增殖活性和转染细胞上清培养NIH3T3细胞的增殖情况。反复传代、冻存和复苏鉴定表达的稳定性。结果:获得稳定且高效表达rhPDGF-BB的CHO细胞系;转染前后细胞生长速度存在差异,NIH3T3细胞的增殖随转染细胞上清的浓度和培养时间的增加而增加。结论:pSELECT-GFPzeo-MCS载体能作为稳定表达的载体用于筛选。稳定表达rhPDGF-BB的CHO细胞具有新的生物学功能,实现了组织工程种子细胞的构建,为研究糖尿病溃疡创面愈合的生物材料提供实验基础。; 董荣娜毋中明宋丹张绍敏李兰英于德民; 关键词：血小板源性生长因子 CHO细胞皮肤溃疡糖尿病并发症

促溃疡愈合细胞/水凝胶三维复合物的初步构建及表征被引量：1: 2012年; 目的:应用壳聚糖衍生物水凝胶负载表达人血小板衍化生长因子-BB的CHO细胞系,初步构建促溃疡愈合复合物。方法:选择壳聚糖经N-乙酰-L-半胱氨酸修饰后合成含巯基的双硫键壳聚糖,加水合成水凝胶,用MTT法检测生物相容性并负载转基因CHO细胞,构建促溃疡愈合复合物并进行表征。结果:该水凝胶材料与转基因CHO细胞系生物相容性良好。水凝胶呈网格结构,孔径一致、细胞黏附生长,负载转基因CHO细胞构成三维复合物。结论:CHO-rhPDGF-BB细胞具有新的生物学功能,水凝胶与该细胞相容性良好,为研究糖尿病溃疡创面愈合提供了实验基础。; 董荣娜毋中明于德民; 关键词：PDGF-BB CHO细胞系糖尿病溃疡

含绿色荧光蛋白报告基因rhPDGF-BB非融合型表达载体的构建及其转染被引量：1: 2008年; 目的:构建并转染含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组人血小板衍化生长因子-BB(rhPDGF-BB)非融合型表达载体,为采用转基因工程化细胞修复糖尿病溃疡创面奠定基础。方法:从人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)中分离总RNA,行RT-PCR获得rhPDGF-BB cDNA,构建克隆质粒pMD19-T/rhPDGF-BB,经测序正确后,再将该目的片段与真核表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs连接,转化E.coli DH5α感受态菌落筛选得到含GFP报告基因的非融合型表达载体,然后将其转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)并用免疫组化染色法鉴定。结果:PCR获得长度为681bp的目的片段,经pSELECT-GFPzeo-mcs载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的rhPDGF-BB cDNA序列(NM-033016)完全匹配。结论:成功构建了非融合型表达载体pSELECT-GFPzeo-mcs/rhPDGF-BB,并实现了rhPDGF-BB基因在CHO的表达。; 张绍敏毋中明宋丹李兰英于德民; 关键词：绿色荧光蛋白质类仓鼠卵巢转染

不同形式生物人工胰腺的研究进展: 2008年; 目前，糖尿病患者胰岛移植治疗方面仍存在供者短缺与长期使用免疫抑制剂的问题，因此，生物人工胰腺（Bioartificial pancreas，BAP）相对于传统胰岛移植而言具有较强的优势。BAP通过采用一种半通透性膜材料包裹胰岛素分泌细胞调控血糖，该装置可使患者避免长期使用免疫抑制剂，并且允许使用动物胰岛、干细胞诱导或基因工程化胰岛素分泌细胞，以此解决供者短缺问题。本文综述了国内外有关BAP发展的研究概况，包括不同膜材料的微囊、扩散室、生物血管复合物装置以及糖敏感性BAP等。; 毋中明张绍敏宋丹; 关键词：人工胰腺胰岛素分泌细胞胰岛移植 BAP 细胞调控

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中国博士后科学基金(20070410766)