国家自然科学基金(31372315)
- 作品数：18 被引量：37H指数：4
- 相关作者：戴建军张树山张德福吴彩凤陈亚宁更多>>
- 相关机构：上海市农业科学院上海海洋大学上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 克隆猪隐睾症雌雄激素及其受体基因表达的研究被引量：2
- 2015年
- 利用化学发光免疫技术测定了3头隐睾克隆猪和3头正常猪不同阶段(2—6月龄)的睾酮(T)和雌二醇(E_2)激素的水平;运用相对荧光定量PCR技术检测AR和ER基因在睾丸组织中的mRNA表达量。结果表明:正常猪血清T和E_2浓度从2月龄到6月龄呈上升趋势,隐睾克隆猪血清E_2浓度变化趋势与对照组相似,T变化趋势为先缓慢升高然后降低,5月龄达到最高[(1.98±1.06)ng/mL],且各阶段血清浓度均显著低于正常猪;ER基因在克隆猪睾丸中表达量高于对照组,但差异不显著,AR基因表达量则反之,且差异显著。血清T的低水平和睾丸AR基因mRNA低表达均可能是引起克隆猪发生隐睾的因素。
- 李芳芳戴建军吴彩凤张树山王昕吴鋆龙
- 关键词：克隆猪隐睾睾酮受体
- 冷冻保存对猪耳成纤维细胞H19和IGF2R基因DNA甲基化和基因表达的影响被引量：1
- 2018年
- 为探索冷冻保存对猪体细胞H19和IGF2R基因DNA甲基化的影响,本研究以梅山猪耳成纤维细胞为材料,采用亚硫酸氢盐测序和RT-PCR技术,检测了新鲜和冷冻保存细胞中H19和IGF2R基因的DNA甲基化状态和表达量,并对甲基化相关基因的表达水平进行分析。结果表明:冷冻组中H19基因DMR1和DMR3的甲基化率极显著高于新鲜组(P<0.01),H19基因DMR2表现为去甲基化,极显著低于新鲜组中的甲基化率(P<0.01),且该基因表达量极显著高于新鲜组(P<0.01);冷冻组IGF2R基因DMR2表现为超甲基化,冷冻组极显著高于新鲜组中的甲基化率(P<0.01),但IGF2R基因表达量无显著差异(P>0.05);冷冻组中DNMT3A和DNMT1的基因表达量极显著高于新鲜组(P<0.01),DNMT3B基因表达量则无显著差异(P>0.05)。本实验条件下,冷冻保存影响了H19和IGF2R基因甲基化控制区的DNA甲基化状态,从而影响了该基因的表达水平。
- 张宏丽陈晓戴建军姚惠娟姚惠娟张德福
- 关键词：梅山猪冷冻保存DNA甲基化基因表达
- 猪冷冻精子的细胞凋亡及凋亡途径初步研究被引量：5
- 2015年
- 旨在研究低温冷冻解冻对精子细胞凋亡的影响,并探讨凋亡发生的可能相关途径。采用流式细胞仪检测解冻后精子内的ROS水平和TUNEL染色后的细胞凋亡情况,使用酶标仪检测精子内ATP含量,利用相对荧光定量PCR技术检测不同凋亡途径中相关基因的表达量变化。结果表明:冷冻后精子活力、顶体和质膜完整率显著下降(P<0.05);冷冻精子TUNEL染色后的凋亡率(80.4%)与新鲜组(9.7%)相比显著升高(P<0.05);冷冻组精子内ROS绿色荧光比率(58.2%)亦显著高于新鲜组(P<0.05);与新鲜组0.926μmol·L-1的ATP浓度相比,冷冻组精子的ATP浓度(0.247μmol·L-1)则显著下降(P<0.05);qRT-PCR检测结果显示,冷冻组中TNF-α、Fas、Caspase家族、P53和Bax基因相对表达量升高,其中Fas、P53、TNF-α、Caspase-8和Caspase-9等相对表达量显著升高(P<0.05);BCL-2、BIRC-5、MnSOD、CuZnSOD和SURVIVN基因相对表达量降低,其中BIRC-5、MnSOD、SURVIVN显著降低(P<0.05)。结果表明:低温冷冻解冻会使猪精子细胞发生严重的凋亡,死亡受体外源性凋亡途径和线粒体内源性凋亡途径均可能介导了冷冻后精子的凋亡。
- 王昕戴建军吴彩凤张树山张树山张德福
- 关键词：细胞凋亡凋亡途径
- 线粒体靶向抗氧化剂MitoQ对猪孤雌激活囊胚冷冻保存的影响
- 2021年
- 在卵母细胞体外成熟、胚胎培养及玻璃化冷冻与解冻过程中全程添加200 nmol∕L MitoQ,观察其对猪孤雌激活囊胚解冻后线粒体膜电位、TUNEL凋亡水平、活性氧(ROS)水平、脂质氧化产物(MDA)水平、总Caspase蛋白表达水平及凋亡氧化相关基因表达水平的影响。结果表明:添加MitoQ冷冻后其囊胚线粒体膜电位(0.83)相比对照组(0.52)显著升高;囊胚凋亡阳性细胞比例(22.36%)相比对照组(36.42%)显著降低;MDA含量(37.64 nmol∕L)与ROS荧光强度(26.32)相比对照组(49.83 nmol∕L与35.70)显著降低;总Caspase活性荧光强度(20.65)相比对照组(42.47)显著降低;相比对照组,Bcl-2、DNM1、CuZnSOD和MFN2基因的表达水平显著提升,Bax和TNF-α基因的相对表达量则显著下降。综上,全程添加MitoQ能够降低猪孤雌激活囊胚的氧化损伤、改善线粒体功能,并通过调节相关基因的表达水平,达到降低其细胞凋亡和提高其抗冻能力的目的。
- 王文杰葛雷张树山吴彩风戴建军张德福
- 关键词：孤雌激活囊胚氧化应激冷冻保存
- 体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究被引量：1
- 2014年
- 为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。
- 戴建军吴彩凤张树山顾晓龙张廷宇吴志强张德福
- 关键词：植酸酶
- 体细胞克隆技术及其存在的问题被引量：4
- 2016年
- 阐述了体细胞克隆技术在生命科学和畜牧业中应用的重大价值,该技术是当今生物技术中最重要的研究领域之一,但还存在着一些问题;详细分析、讨论了目前克隆技术存在的问题。
- 张德福戴建军吴彩凤张树山
- 关键词：克隆技术生命科学畜牧业
- 猪MII期卵母细胞冷冻前后全基因组表达谱分析
- 2019年
- 为探究猪MII期卵母细胞冷冻前后基因表达的变化,采用猪全基因组表达谱芯片对其冷冻前后的基因进行表达谱分析,筛选出2倍以上差异表达基因,并利用生物信息学对这些基因进行GO和KEGG Pathway分析。结果表明:(1)猪卵母细胞玻璃化冷冻前后共获得2倍以上差异表达基因171个,其中冻后上调表达基因103个,下调表达基因68个;选取的6个差异表达基因的RT-PCR验证结果与芯片分析结果一致。(2)损伤应答、细胞凋亡、程序性细胞死亡、细胞坏死及蛋白激酶调节、RNA拼接、核mRNA拼接和mRNA代谢等参与了卵母细胞冻后基因差异表达的生物学过程;(3)胞外区、基底质膜、细胞外间隙、质膜、肌动蛋白细胞骨架、线粒体脊、线粒体、细胞器膜和线粒体包膜等参与了卵母细胞冻后基因差异表达的细胞组分调控;(4)类固醇结合、酶抑制剂的活性、激素结合、核苷酸结合、辅酶结合和ATP酶活等参与了卵母细胞冻后差异表达基因的分子功能调控。(5) KEGG Pathway分析表明,Toll样受体信号通路、NOD样受体信号通路、黏着连接和MAPK信号通路等参与了冻后卵母细胞的基因表达调控。综上所述,冷冻能造成猪MII期卵母细胞多系统的损伤,如线粒体损伤、凋亡、坏死、质膜损伤和RNA拼接与代谢异常等。
- 戴建军吴彩凤吴彩凤张树山陈亚宁张德福
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻表达谱基因芯片
- 线粒体靶向抗氧化剂MitoQ在猪卵母细胞冷冻保存中的应用
- 2020年
- 在猪卵母细胞解冻后的孵育液中添加线粒体靶向抗氧化剂MitoQ,通过检测线粒体膜电位、早期凋亡、脂质氧化、活性氧、胚胎发育水平以及相关基因表达水平等,研究MitoQ在猪卵母细胞冷冻保存中的作用.结果表明:猪卵母细胞冷冻后使用MitoQ处理,其线粒体膜电位(0.66±0.06)与对照组(0.47±0.05)相比显著升高,早期凋亡比率(43.00%±3.51%)与对照组(55.33%±1.45%)相比显著下降;冷冻后MitoQ处理猪卵母细胞,其活性氧水平(3.03±0.61)与脂质氧化水平(20.54±0.91)与对照组(13.13±1.52和26.78±0.54)相比显著下降;冷冻后MitoQ处理猪卵母细胞的存活率(60.33%±1.86%)、卵裂率(28.82%±1.38%)和囊胚率(4.50%±0.48%)与对照组组(47.67%±1.67%、22.07%±1.07%和2.20%±0.51%)相比显著升高;在基因表达方面,与对照组相比,冷冻后MitoQ处理组其Bcl-2、CuZnSOD和Mfn2相对表达量显著提升,DNM1、Bax和TNF-α相对表达量则显著下降.综上,在冻后孵育液中添加MitoQ能够提高线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,抑制细胞凋亡和改善相关基因表达水平,从而提高冷冻后猪卵母细胞的体外发育能力.
- 王文杰葛雷张树山吴彩风戴建军戴建军
- 关键词：猪卵母细胞氧化应激
- 成熟液中添加白藜芦醇对猪卵母细胞体外发育和抗冻能力的影响被引量：5
- 2018年
- 为探究猪卵母细胞成熟培养液中添加白藜芦醇(resveratrol,RES)对其体外发育与抗冻能力的影响,本试验通过添加不同浓度的RES,观察其对卵母细胞体外发育和相关基因的表达的影响;通过OPS(Open Pulled Straw)玻璃化冷冻和解冻,观察RES对卵母细胞冷冻前后线粒体功能、凋亡和发育能力的影响。结果表明:(1)成熟培养液中添加2μmol/L RES有利于提高猪卵母细胞的体外成熟和发育能力,提高RES浓度至10μmol/L时则表现为细胞毒性作用;(2)添加2μmol/L RES可显著提高卵母细胞Sirt1、MATER、SOD1和Bcl2基因的表达量,并显著降低c-mos、MAPK和Mfn2的表达;当RES添加量增至10μmol/L时,卵母细胞凋亡相关基因的表达呈现出促凋亡状态;(3)添加RES后,猪MII期卵母细胞的ROS水平在冷冻前后均分别低于为添加组,细胞内ATP含量和膜电位值则分别高于未添加组;(4)成熟液中添加RES可提高玻璃化冷冻后卵母细胞的FDA染色存活率和孤雌激活卵裂率,并降低早期凋亡比例,其中FDA染色存活率差异显著。综上所述,2μmol/L的RES在猪卵母细胞成熟液中添加,可通过改善其发育和凋亡相关基因的表达,提高线粒体功能,达到提高卵母细胞发育和抗冻能力的目的。
- 戴建军吴彩凤吴彩凤张树山陈亚宁张德福
- 关键词：卵母细胞白藜芦醇抗冻能力
- 玻璃化快速冷冻仪在猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻中的应用被引量：3
- 2014年
- 为了提高猪成熟卵母细胞玻璃化冷冻效果,应用玻璃化快速冷冻仪(Vit-Master)进行猪成熟卵母细胞的冷冻,以观察其冷冻效果。结果显示:浆状液氮降温速率[(21 345±l768)℃/min]远远高于普通液氮降温速率[(11 982±1 936)℃/min];各组冻后形态完整率无显著差异;冻后存活率为:使用玻璃化快速冷冻仪的不同浓度保护剂组[A':(57.87±10.66)%、B':(76.5±10.33%)、C':(79.07±14.90)%和D':(81.94±6.98%)]均分别高于对应的不使用玻璃化快速冷冻仪组[A:(49.73±2.91)%、B:(60.63±12.45)%、C:(71.33±14.38)%和D:(78.50±7.40)%],但均无显著差异,B'和C'组均高于C和D组,但差异不显著,A和A'组均显著低于B'、C'和D'组。因此,通过使用Vit-Master冷冻装置提高冷冻速率,可以降低冷冻保护剂使用浓度并提高冻后存活率。
- 徐利戴建军张廷宇吴彩凤李维杰张树山顾晓龙李翔韩晓李芳芳
- 关键词：卵母细胞玻璃化冷冻
