国家自然科学基金(30970056)
- 作品数：13 被引量：90H指数：6
- 相关作者：饶志明夏海锋徐美娟张显杨套伟更多>>
- 相关机构：江南大学浙江大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学理学更多>>
- 一种耐低温α-乙酰乳酸脱羧酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达被引量：5
- 2013年
- 从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中。SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilisWB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103。采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8%。该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20～35℃范围内均表现出较高的活性。Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失。经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍。经5 L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL。
- 李静静徐美娟张显饶志明
- 关键词：枯草芽孢杆菌Α-乙酰乳酸脱羧酶耐低温双乙酰酶学性质
- 从植物乳杆菌全细胞转化液中分离纯化γ-氨基丁酸的工艺研究被引量：6
- 2010年
- 前期筛选获得1株高效转化L-谷氨酸为γ-氨基丁酸(GABA)的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)GB01-21,该菌以浓度200 g/L的L-谷氨酸为底物,发酵20 h左右,能以99%的摩尔转化率生产γ-氨基丁酸,产物γ-氨基丁酸的终浓度可达140 g/L左右。从全细胞转化液中分离纯化γ-氨基丁酸,着重对脱色工艺进行了研究,考察了温度、时间、pH和活性炭添加量对脱色效果的影响。通过单因素实验的基础上的正交实验分析,确定了脱色最佳工艺条件为粉末活性炭(150～200目)用量为1.5%,脱色温度70℃,pH值4.0,脱色时间40 min,γ-氨基丁酸转化液的脱色率高达98.42%,γ-氨基丁酸的保留率可达97.23%。随后对γ-氨基丁酸转化液进行初步分离纯化,最终测得γ-氨基丁酸的回收率89.4%,纯度为96.7%。
- 张术聪刘婷婷杨套伟夏海锋饶志明
- 关键词：Γ-氨基丁酸脱色分离纯化
- 疏水性电荷诱导层析——原理、性能及其应用
- 2010年
- 介绍了疏水性电荷诱导层析(hydrophobic charge induction chromatography,HCIC)的原理及特点:其功能基团结合了疏水作用和静电相互作用,是一种混合型的双模式层析方法。由于HCIC在蛋白质(特别是抗体)的分离纯化中表现出操作简便、选择性较好等优点,受到了学术界和工业界的关注。对HCIC的技术原理、发展历程、层析行为以及应用现状等进行综述,以期对HCIC的深入研究和应用开发提供指导。
- 夏海锋林东强姚善泾
- 关键词：生物分离
- 三种酵母启动子在毕赤酵母中的功能比较被引量：11
- 2011年
- 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子功能的强弱对于目的基因的表达非常重要。为找到一个启动转录功能较好的启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,在毕赤酵母中研究不同启动子对外源蛋白表达的影响。首先采用PCR扩增的方法克隆了酿酒酵母甘油合成关键酶3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子pScgpd,借助于载体pPIC9K和pGAPZB,构建pPIC9K-gfp和pPIC9K-PG,pGAPZB-gfp和pGPDZB-gfp,将重组载体分别转入毕赤酵母GS115和毕赤酵母X33中,在不同渗透压条件下培养重组菌,通过GFP的表达情况比较启动子pScgpd与甲醇氧化酶启动子pAOX1、3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子pGAP的功能。荧光显微镜观察结果显示,pScgpd表现为受高渗条件诱导,重组毕赤酵母P.pastoris GS115和P.pastoris X33均能产生稳定的荧光,且在一定范围内随着葡萄糖或NaCl浓度的增加,GFP表达强度也有所增加;但分别与对应宿主P.pastorisGS115、P.pastoris X33的启动子pAOX1和启动子pGAP相比,表达水平仍较弱。
- 蒋慧慧李丰功陆毅饶志明
- 关键词：毕赤酵母绿色荧光蛋白
- 一株产灵菌红素粘质沙雷氏菌的筛选、鉴定及发酵条件被引量：17
- 2012年
- 利用贫营养条件,从土壤样品中筛选到一株产红色素的菌株。经形态学、生理生化实验进行菌株初步鉴定,并经16S rDNA测序分析确定该菌株为粘质沙雷氏菌属,将其命名为:Serratiamarcescens JNB5-1。该菌株所产红色素经全波长扫描及LC-MS确定为灵菌红素。对Serratiamarcecens JNB5-1产灵菌红素做初步发酵研究,在蔗糖2 g/dL,牛肉膏1.5 g/dL,CaCl21 g/dL,脯氨酸0.75 g/dL,MgSO4.7H2O 0.02 g/dL,FeSO4.7H2O 0.006 g/dL的培养基中发酵72 h后,其发酵产量可达4.139 g/L。
- 李子武张显徐美娟夏海锋饶志明
- 关键词：灵菌红素发酵条件
- 钝齿棒杆菌N-乙酰鸟氨酸转氨酶的克隆表达分析及其重组菌的精氨酸发酵被引量：7
- 2011年
- N-乙酰鸟氨酸转氨酶(EC 2.6.1.11,ACOAT)是钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum精氨酸合成途径中的第4个酶,催化底物N-乙酰谷氨酸半醛生成产物N-乙酰鸟氨酸。为研究N-乙酰鸟氨酸转氨酶在钝齿棒杆菌中精氨酸合成中的作用,考察其酶学性质,对培养基成分和发酵过程工艺条件的优化提高精氨酸产量提供依据。从精氨酸高产菌株钝齿棒杆菌SYPA 5-5染色体扩增获得ACOAT编码基因argD,全长1 176 bp,编码390个氨基酸,在Escherichia coli BL21(DE3)及C.crenatum SYPA中成功表达。采用Ni柱亲和层析纯化后获得的重组蛋白比酶活达108.2 U/g,对其部分酶学性质进行初步研究。构建重组钝齿棒杆菌C.crenatum SYPA(pJCtac-CcargD),加强精氨酸合成途径ACOAT蛋白表达量,对重组菌产精氨酸进行初步发酵分析。多次发酵结果表明重组钝齿棒杆菌与出发菌株相比胞内ACOAT酶活得以增强;重组菌CCD1精氨酸平均产量为39.7 g/L,产酸提高14.7%。结果还表明在重组菌发酵精氨酸的同时不仅ACOAT得到了加强表达,同时还提高了重组菌在发酵过程中菌体自身的氧利用率。
- 徐美娟张显饶志明杨娟窦文芳金坚许正宏
- 关键词：钝齿棒杆菌L-精氨酸酶学性质发酵
- β-甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达被引量：11
- 2012年
- 从Bacillus subtilis JNA 3-10中克隆出β-甘露聚糖酶基因成熟肽链编码序列manA1和含信号肽的β-甘露聚糖酶基因manA2,在B.subtilis 168中克隆表达,分别筛选获得高效分泌表达β-甘露聚糖酶的重组菌株BPM1001(pMA5-manA1/B.subtilis 168)和BPM1002(pMA5-manA2/B.subtilis 168),结果表明菌株BPM1002总酶活力是菌株BPM1001的9.65倍,是原始菌株的13.1倍.在基因manA2下游引入His序列克隆出β-甘露聚糖酶基因manA3,获得枯草芽孢杆菌168重组菌株BPM1003.采用Ni-NTA柱纯化重组菌株BPM1003分泌表达的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质,该酶促反应的最适pH为6.5,最适温度为65℃,在37℃条件下保存一个月酶活力依然保留有77.8%.5 L发酵罐放大实验结果表明魔芋粉对于产β-甘露聚糖酶具有明显的诱导作用,酶活力最高可达2 748.82 U/mL.
- 刘项羽徐美娟杨套伟张显饶志明
- 关键词：Β-甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌信号肽重组菌株酶学性质
- 一株以葡萄糖为底物产2,3-丁二醇微生物菌株的筛选及鉴定被引量：3
- 2010年
- 从自然界中筛选出一批以葡萄糖为底物发酵产2,3-丁二醇的菌株,经初步发酵测定发酵液中2,3-丁二醇含量,其中菌株6-7的2,3-丁二醇产量最高达49.6g/L。对其进行常规生理生化鉴定实验,并结合16SrDNA序列分析,比对结果表明,菌株6-7与Bacillus subtilis strain BIHB332相似性达99%。在细菌分类学上属于枯草芽孢杆菌属,将其命名为Bacillussubtilis6-7。其特点是属于环境友好和食品安全型菌株,因此,利用Bacillus subtilis6-7生产2,3-丁二醇具有良好的工业应用价值。
- 林清张显杨套伟徐美娟张术聪夏海锋饶志明
- 关键词：2,3-丁二醇枯草芽孢杆菌
- 镍离子亲和层析介质的制备及其用于组氨酸标记蛋白质的纯化被引量：9
- 2010年
- 以交联琼脂糖微球为基质,通过环氧氯丙烷活化,偶联亚胺二乙酸并螯合N i2+,制备得到一种镍离子亲和层析介质。结果发现,在强碱条件下环氧活化率达到了38.0μmol/mL,最终N i2+配基密度达到了30.9μmol/mL,偶联效率为81.3%。利用得到的镍离子亲和介质对基因工程大肠杆菌表达的组氨酸标记3-羟基丁酮还原酶进行了一步层析纯化,酶活回收率达到了58.8%,纯化倍数为2.1,蛋白纯度在85%左右,纯化效果与常用商品介质基本相当。
- 夏海锋张显金雄华刘婷婷郑志永饶志明
- 关键词：克隆表达纯化
- 琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰及其性能鉴定被引量：3
- 2011年
- 采用烯丙基缩水甘油醚对国产交联琼脂糖凝胶进行活化,与巯基乙酸反应后,偶联N-羟基丁二酰亚胺(NHS),得到连接臂长度为10个原子、具有对氨基高度特异性的琼脂糖凝胶活化中间体.通过控制琼脂糖凝胶活化双键的量,可使NHS的修饰密度处在较宽范围(20～150μmol/mL),有效减少介质上杂基团的引入并有利于配基密度的设计.活化过程对介质的理化性能无明显影响,活化介质在30min内即可完成对L-苯丙氨酸的偶联,效率在90%以上,且在多种溶液中贮藏30d后配基稳定性良好,几乎无泄露.
- 吴璞强金雄华夏海锋郑志永饶志明
- 关键词：表面修饰活化N-羟基丁二酰亚胺烯丙基缩水甘油醚
