国家自然科学基金(30400539)
- 作品数：4 被引量：20H指数：2
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- shRNA下调人端粒酶逆转录酶基因抑制膀胱癌细胞生长作用的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的 探讨靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因shRNA载体,下调c myc和TGF -β1表达抑制膀胱癌细胞生长的作用机理。 方法 采用RNAi DNA载体技术,构建靶向hTERT基因不同片段的shRNA -hTERT pTZU6+1真核表达载体,转染入膀胱癌T24细胞内, RT -PCR法检测hTERT基因表达筛选最有效的shRNA hTERT pTZU6+1载体,并转染至T24细胞内,流式细胞术检测对细胞生长周期的影响, RT PCR和免疫组织化学检测转染前后hTERT、c- myc和TGF -β1的表达。 结果 成功构建3个shRNA- hTERT pTZU6+1真核表达质粒,以1. 0μg的ph2 shRNA为最佳浓度的最有效力载体,该载体转染至T24细胞后,引起细胞生长减慢,细胞周期中S期细胞数由65. 2%减少至38. 6%,G1 /G0细胞由32. 0%增至57. 9%,细胞内hTERT、c -myc和TGF β1表达减弱。 结论 RNAi可通过下调hTERT基因表达抑制膀胱癌细胞生长,其过程是通过下调癌细胞内c -myc和TGF-β1表达途径来进行的。
- 张鹏辉邹琳涂植光
- 关键词：SHRNA人端粒酶逆转录酶基因膀胱癌
- 槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响被引量：14
- 2007年
- 目的观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响。方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNALadder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERTmRNA表达。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48h后的IC50为22.5μmol/L。DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERTmRNA表达降低,端粒酶活性受抑制。结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。
- 王箭张鹏辉涂植光
- 关键词：槲皮素肺腺癌A549细胞凋亡端粒酶HTERT
- bHLH家族基因对hTERT启动子转录活性的调节研究被引量：2
- 2006年
- 目的:研究bHLH家族基因中c-myc和mad1对人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的转录调节。方法:采用脂质体DOTAP转染法将装载有虫荧光素酶基因的野生型hTERT启动子(Tw)和突变型hTERT启动子(Td)质粒,与含c-myc或mad1基因的质粒,以不同方式组合分别转染至膀胱癌T24细胞、EJ细胞、猴肾母COS-7细胞和人成纤维细胞,培养48h后检测各组虫荧光素酶活性。结果:在膀胱癌T24和EJ细胞中,Tw组转录活性显著高于对照组,亦高于Td组。在T24和EJ细胞中,c-myc可呈剂量依赖地上调Tw的转录活性,但负性调节Td转录;而mad1负性调节Tw转录,但上调Td的转录活性。c-myc和mad1联合可下调膀胱癌细胞Tw的转录。结论:c-myc和mad1可对hTERT启动子进行转录调节,并且高度依赖于bHLH家族基因的接合位点E-box的序列保守性。
- 张鹏辉邹琳涂植光
- 关键词：基因端粒酶逆转录酶
- 端粒酶逆转录酶启动子hTERT／U6嵌合启动子的siRNA表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应。方法构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-7721),观察细胞荧光的变化及RT-PCR,Western blot筛选出更有效的siRNA-EGFP-PTZU6+1载体。PCR扩增端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase promoter,hTERT)启动子的核心序列,构建针对EGFP基因的hTERT/U6嵌合启动子siRNA表达载体(EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT),正向和反向插入的hTERT启动子各1个,并将其转染至EGFP-7721细胞中,RT-PCR验证其效应。结果RT-PCR,Western blot结果表明两重组质粒siRNA-EGFP-PTZU6+1转染EGFP-7721细胞后EGFP基因的表达无统计学差异,但与对照组比较均显著抑制了EGFP基因(P<0.01)。而且,RT-PCR结果显示,反向插入的重组质粒EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT与对照组相比显著抑制了EGFP基因的表达(P<0.05)。结论构建的含hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体在肝癌细胞中具有功能活性,为探讨基因的靶向治疗奠定了基础。
- 姜习新张鹏辉刘北忠涂植光杨毅刘靳波
- 关键词：端粒酶逆转录酶启动子SIRNA表达载体
