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适用于蛋白质双向电泳的棉花胚性培养物蛋白质提取技术被引量：9: 2009年; 以陆地棉品种Coker 201为材料,对与甲醇/醋酸铵丙酮沉淀结合的酚抽提法和裂解液配方进行了优化,建立了适用于蛋白质双向电泳体系的棉花胚性培养物蛋白质样品制备技术。对胚性培养物,通过添加PVPP研磨和丙酮、TCA/丙酮、甲醇/醋酸铵等有机溶剂的系列洗涤,然后再进行酚抽提,蛋白质质量得到显著改善,获得的2-DE图谱质量高、可分辨的蛋白质点数多。比较分析3种裂解液对蛋白质的溶解效果发现,在裂解液中混合采用7 mol.L-1尿素2、mol.L-1硫脲以及4%CHAPS是最有效的配方。; 曹景林朱龙付谭家福邓锋林李允静郝娟徐士成张献龙; 关键词：棉花蛋白质双向电泳

副猪嗜血杆菌血清5型间接血凝试验和间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：39: 2007年; 为建立副猪嗜血杆菌（HPS）的血清学诊断方法，通过探索HPS荚膜多糖产生的最适体外培养条件，提取了HPS血清5型菌株的荚膜多糖（CPS），并以之为抗原分别建立了间接血凝试验（IHA）和间接ELISA两种抗体检测方法，对其特异性、敏感性和符合率进行了比较研究。结果表明，两种检测方法的特异性良好，但ELISA的敏感性是IHA的5～10倍，二者的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为79．7％、55．2％和65．3％。用这两种方法检测了320份临床送检猪血清，IHA和ELISA的阳性率分别为40％和59％。结果证实，这两种方法适用于不同实验室条件下HPS的诊断和流行病学调查。; 石碧崔耀文贾凡金卉万云蔡旭旺方刚陈焕春周锐; 关键词：副猪嗜血杆菌荚膜多糖间接血凝试验间接ELISA

胸膜肺炎放线杆菌萘啶酸抗性菌株的选育和信号标签突变株的构建被引量：3: 2008年; 胸膜肺炎放线杆菌(APP)是重要的猪呼吸道病原菌,给世界养猪业造成严重的经济损失。信号标签突变(STM)技术是在宿主动物体内鉴定病原菌毒力因子的高通量方法。通过体外传代选育出APP血清1型和3型萘啶酸抗性菌株,再以萘啶酸抗性菌株为受体菌,以携带mini-Tn10的标签质粒(pLOF/TAG1-48)的E.coliCC118λpir或S17-1λpir为供体菌,在或不在E.coliDH5α(pRK2073)的辅助下,进行三亲本或两亲本接合,通过抗性筛选、PCR和Southern杂交鉴定转座突变株。结果表明:体外萘啶酸加压传代很容易选育出萘啶酸抗性APP菌株,该抗性的产生与DNA促旋酶A亚基基因gyrA的突变有关。在APP与E.coli接合实验中,两亲本接合比三亲本接合操作更简单,效率也较高;APP不同菌株在接合和转座效率上存在很大差异,血清1型菌株高于血清3型菌株,3型标准菌株高于地方分离株JL03-R。本研究为APPSTM突变体库的构建与毒力基因的鉴定奠定了基础。; 商霖李薇李良军黎璐张四化李婷婷李耀坤刘磊郭志伟周锐陈焕春; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌

棉花高效体细胞胚发生及同步控制培养体系研究被引量：12: 2008年; 棉花体细胞胚胎发生的频率低,且体细胞胚的发育存在着不同步性,给体细胞胚胎发生发育过程的生理学、生物化学和分子生物学的研究带来许多困难。本研究以陆地棉品种Coker201为材料,建立了一种简单有效的棉花体细胞胚高频率发生和同步发育的培养体系。经过多次继代获得的胚性愈伤,首先在液体培养基中振荡培养2d使其分散,然后过30目筛去除大的颗粒,重新悬浮于同样的液体培养基中。悬浮培养14d后,过50目筛,将筛上的胚性愈伤重悬浮于新鲜的培养基中,并用吸管吸取悬浮液,将其均匀地接种在表面垫有滤纸的同成分固体培养基(附加2.46μmolL-1IBA和0.70μmolL-1kinetin)上。培养21d后,用垫有滤纸的相同的固体培养基继代培养。利用这种培养体系,获得的体细胞胚数量分别是单纯悬浮培养和固体培养(不垫滤纸)的16.5倍和4.0倍。其中,球形胚、鱼雷形胚和子叶胚的同步发生率分别为70.2%、52.3%和73.0%。; 曹景林张献龙金双侠杨细燕朱华国付莉莉; 关键词：棉花体细胞胚胎发生同步控制

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ-ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用被引量：4: 2009年; 根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的特点,建立了一种能够诊断猪传染性胸膜肺炎和进行免疫后效果评估的血清学方法ApxⅡ-ELISA。本研究将该诊断方法进一步研制成试剂盒,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行了测试,与间接血凝试验试剂盒进行了对比研究,并用该试剂盒检测了来自中国、英国、丹麦、美国、加拿大和澳大利亚的临床猪血清1 453份。结果表明,ApxⅡ-ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性;3批试剂盒的批内和批间的重复性良好(变异系数均<15%);试剂盒在2～8℃保存9个月,稳定性良好;ApxⅡ-ELISA试剂盒能够有效的诊断猪传染性胸膜肺炎,同时也可作为一种评价猪群免疫后免疫效果的有效方法。; 贾凡王建银胡军勇石碧李树清陈焕春周锐; 关键词：胸膜肺炎放线杆菌

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-04-0740)