国家自然科学基金(81000416) 作品数:9 被引量:19 H指数:3 相关作者: 王正辉 常会敏 卢晓云 吴宝俊 杨壮群 更多>> 相关机构: 西安交通大学 西安交通大学第一附属医院 挪威卑尔根大学 更多>> 发文基金: 中央高校基本科研业务费专项资金 国家自然科学基金 陕西省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
PhaP-RGD融合蛋白修饰的PHBHHx与人鼻中隔软骨细胞的生物相容性研究 2013年 目的观察经PhaP-RGD融合蛋白修饰的3-羟基丁酸和3-羟基己酸的共聚酯(PHBHHx)生物材料与人鼻中隔软骨细胞的生物相容性。方法体外培养人鼻中隔软骨细胞,接种于经PhaP-RGD融合蛋白修饰的PHBHHx膜性材料上进行体外培养,通过MTT比色法、DAPI染色、扫描电镜、甲苯胺蓝染色等实验方法观察在体外条件下生物修饰后的PHBHHx膜与鼻中隔软骨细胞的生物相容性。结果经PhaP-RGD融合蛋白修饰的PHBHHx膜表面接触角变小,亲水性增加;人鼻中隔软骨细胞在蛋白修饰后的生物膜材料表面能保持较高的增殖率;经蛋白修饰的PHBHHx膜表面的软骨细胞活力明显高于细胞培养板及未经蛋白修饰的PHBHHx膜上的软骨细胞;甲苯氨蓝染色发现经PhaP-RGD修饰的PHBHHx膜能促进软骨细胞分泌胞外基质糖胺多糖。结论经PhaP-RGD融合蛋白修饰的PHBHHx与软骨细胞的生物相容性良好,是一种较理想的软骨组织工程支架材料。 常会敏 高天喜 王正辉 卢晓云 吴宝俊 张向红聚羟基脂肪酸酯的生物修饰及其生物相容性研究 被引量:7 2014年 目的探讨经聚羟基脂肪酸酯表面颗粒结合蛋白(polyhydroxyalkanoates granule binding protein,PhaP)-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)融合蛋白修饰后的聚羟基丁酸戊酸酯[poly(3-hydroxybutyrateco-3-hydroxyvalerate),PHBV]和聚羟基丁酸己酸酯[poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyhexanoate),PHBHHx]的亲水性及其与软骨细胞的生物相容性。方法利用溶剂挥发法制备PHBV和PHBHHx生物膜材料,扫描电镜观察材料结构;通过蛋白工程技术表达纯化PhaP-RGD融合蛋白,按照3.5 mg/mL浓度对两种生物膜材料进行蛋白修饰,通过测量接触角检测蛋白修饰前后材料表面亲疏水性的改变。采用三步消化法体外分离培养人鼻中隔软骨细胞并传代。取第2代细胞分别接种于PHBV(A1组)、PHBV/PhaP-RGD(A2组)、PHBHHx(B1组)、PHBHHx/PhaP-RGD(B2组)、细胞培养板(C组)。培养3 d后行DAPI染色观察细胞增殖情况;3、7 d通过MTT法检测细胞增殖能力;7 d扫描电镜下观察细胞在生物膜材料表面的贴附及形态结构,并通过甲苯胺蓝染色初步检测细胞外基质分泌情况。结果扫描电镜观察示PHBV和PHBHHx生物膜材料表面为多孔结构;经融合蛋白修饰后PHBV、PHBHHx生物膜材料表面接触角均显著减小,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞接种于生物膜材料表面后均能生长,培养3 d后B2组细胞增殖能力最强(P<0.05);7 d时各组软骨细胞增殖能力均较3 d增强(P<0.05),组间比较B1、B2组高于A1、A2、C组,B2组高于B1组、A1组高于A2组(P<0.05)。培养7 d,甲苯胺蓝染色示A1、A2、B1、B2组材料表面均可见蓝色异染,其中A1、A2组染色程度相似,B2组染色较B1组深;扫描电镜观察示各组细胞贴附良好,细胞之间形成连接,并伸入材料孔隙内。结论经PhaPRGD融合蛋白修饰的PHBHHx生物膜材料与软骨细胞有良好的生物相容性。 高天喜 常会敏 范敏杰 卢晓云 王正辉 张向红 井晓红 史艳霞 李智慧关键词:软骨组织工程 聚羟基脂肪酸酯 生物相容性 不同支架材料体外构建组织工程软骨的研究 2012年 目的:体外构建组织工程软骨,筛选更为适合组织工程软骨构建的支架材料。方法:体外获取SD大鼠肋软骨细胞。采用第一代软骨细胞作为种子细胞,接种于壳聚糖/明胶和BMG/生物蛋白胶支架,体外培养的不同时间对其进行HE、甲苯胺蓝染色、Mas s on染色、免疫学检测、扫描电镜观察。结果:在培养2周时,BMG/生物蛋白胶各种染色结果显示软骨细胞在其表面以及内部分布均匀,蛋白多糖和Ⅱ型胶原染色阳性;壳聚糖/明胶表面细胞稍多于前者,但内部细胞数量极少且分布不均,染色结果不如前者明显。随着培养时间的延长各种检测均显示有大量的软骨细胞特异性的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达,壳聚糖/明胶凸显出明显的优势。结论:体外成功构建组织工程软骨,软骨细胞在BMG/生物蛋白胶上的生长、增殖和分泌基质情况优于壳聚糖/明胶支架。 葛平 王正辉 杨壮群 王瑞 温绣蔺关键词:软骨细胞 松质骨基质复合生物蛋白胶构建组织工程软骨的研究 2012年 目的尝试采用松质骨基质与生物蛋白胶复合材料构建组织工程软骨。方法体外培养大鼠软骨细胞,接种于松质骨基质/生物蛋白胶材料上行体外培养。采用HE、甲苯胺蓝染色免疫学检测、扫描电镜观察等方法观察所构建的组织工程软骨的特性。结果松质骨基质/生物蛋白胶组的组织学结构更接近于软骨样组织,其Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因表达量及蛋白多糖含量明显高于松质骨基质组。结论松质骨基质/生物蛋白胶复合材料可用于构建组织工程软骨,是一种较理想的支架材料。 王正辉 常会敏 吴宝俊 杨壮群 Kamal Mustafa 卢晓云关键词:软骨细胞 生物蛋白胶 Aggrecanase-2表达沉默对体外培养的软骨细胞基质代谢的影响 被引量:2 2012年 目的探讨RNA干扰蛋白聚糖酶-2(Aggrecanase-2)对大鼠肋软骨细胞基质代谢的影响。方法体外分离培养大鼠肋软骨细胞,采用脂质体转染试剂将针对Aggrecanase-2的载体质粒转染软骨细胞,观察转染后细胞生长曲线、细胞形态的变化;RT-PCR检测Aggrecanase-2 mRNA水平的变化;Western Blot检测蛋白多糖(Aggrecan)的变化。结果RNA干扰Aggreanase-2对细胞生长速度及形态无明显影响,可明显降低Aggrecanase-2的mRNA表达水平(P<0.05),增加Aggrecan的含量(P<0.05)。结论抑制Aggrecanase-2可减少蛋白多糖的降解,RNAi是一种有效的研究软骨细胞基质代谢的工具。 王正辉 杨壮群 吴宝俊 常会敏 Kamal Mustafa 卢晓云Sox9诱导人脐血干细胞向软骨细胞分化的实验研究 被引量:5 2015年 目的探讨Sox9基因对脐血干细胞向软骨细胞分化的影响。方法体外分离培养人脐血干细胞,采用脂质体转染Sox9载体质粒,观察转染后细胞形态的变化,免疫组化染色观察collagenⅡ、aggrecan的表达,RT-PCR检测collagenⅠ、collagenⅡ、aggrecan的m RNA水平变化,Western blot检测collagenⅡ的表达变化。结果 Sox9对脐血干细胞形态无明显影响,与传统方法诱导组相比,Sox9转染后可明显促进脐血干细胞向软骨细胞分化。结论 Sox9对脐血干细胞的软骨分化有很强的调控作用,脐血干细胞可作为组织工程软骨一种良好的种子细胞。 张军 张耀明 王正辉 张青 罗花南 郑国玺 侯瑾 王波涛 杨叶叶 赵小燕 史艳霞关键词:脐血干细胞 分化 SOX9基因 Sox9基因转染的人脐带血干细胞复合骨基质明胶/生物蛋白胶构建组织工程软骨的实验研究 被引量:3 2018年 目的探讨Sox9基因转染的人脐带血干细胞(hUCMSC)复合骨基质明胶/生物蛋白胶体内外构建组织工程软骨的效果。方法体外分离培养hUCMSC;采用脂质体转染Sox9载体质粒,将转染的细胞在骨基质明胶/生物蛋白胶材料上体外培养8周,行扫描电子显微镜和组织学观察。选择雄性SD大鼠55只,体质量(150±20)g。将体外形成的软骨样组织移植入SD大鼠背部皮下,8周时行组织学检查,观察软骨形成能力,并进行宿主免疫反应监测。结果体外培养8周后hUCMSC在支架材料上生长良好,分泌大量蛋白多糖和Ⅱ型胶原。移植入大鼠体内8周后,形成软骨样组织,形态学和免疫组织化学染色显示蛋白多糖和Ⅱ型胶原阳性。移植后IgG、IgA、IgM、C3和C4水平与对照组差异无统计学意义[IgG(1.105 6±0.019 2)μg/mL vs(1.145 0±0.023 1)μg/mL(术后28 d),IgM(0.219 1±0.034 3)μg/mL vs(0.348 7±0.030 3)μg/mL(术后28 d),IgA(0.350 7±0.058 5)μg/mL vs(0.367 7±0.042 4)μg/mL(术后28 d),C3(122.65±4.40)μg/mL vs(130.63±2.98)μg/mL(术后28 d),C4(49.89±2.11)μg/mL vs(51.45±3.74)μg/mL(术后28 d)]。Sox9基因转染的hUCMSC复合骨基质明胶/生物蛋白胶构建的组织工程软骨移植入体内后未引起明显的宿主免疫反应。结论Sox9基因转染的hUCMSC可作为组织工程软骨的一种良好的种子细胞来源。 张军 张军 温绣蔺 温绣蔺 王波涛 张阿玲 史艳霞关键词:脐带血干细胞 骨基质明胶 生物蛋白胶 体外培养的脐血间充质干细胞的生物学特性及影响因素 被引量:1 2012年 脐血间充质干细胞是一类从脐带血中分离和培养的成体干细胞,具有高度自我更新和多向分化的潜能。脐血问充质干细胞的这些特性,吸引了众多国内外学者的目光,目前,脐血间充质干细胞移植的临床治疗取得了一定进展。本文就脐血间充质干细胞的采集分离、纯化及生物学特性及研究前景作一简要综述。 王正辉 周林 杨壮群关键词:脐血间充质干细胞 体外培养 间充质干细胞移植 成体干细胞 多向分化 自我更新 RNA干扰技术构建组织工程软骨的实验研究 被引量:3 2012年 目的种子细胞来源是软骨组织工程的研究热点。探讨以RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术干扰多聚蛋白聚糖酶(Aggrecanase)后的软骨细胞作为组织工程种子细胞的可行性。方法取成年SD大鼠肋软骨采用消化法分离培养软骨细胞。取第1代细胞分为空白阴性对照组(对照组)及慢病毒转染组(实验组)两组。将两组细胞分别与壳聚糖/明胶材料进行体外复合培养制备组织工程软骨,于培养后不同时间点通过HE、Masson染色,扫描电镜观察以及RT-PCR方法检测两组软骨中蛋白聚糖(Aggrecan)以及Aggrecanase-1、2的变化情况。结果组织学观察示培养2周时,对照组与实验组相比细胞数量及细胞外基质未见明显差别;随着培养时间延长,实验组较对照组细胞外基质分泌增多,细胞数目更多。RT-PCR结果显示培养4、8周,实验组细胞Aggrecan mRNA表达量明显高于对照组,Aggrecanase-1和Aggrecanase-2 mRNA表达量明显低于对照组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜显示实验组细胞数量明显多于对照组,且细胞间连接紧密。结论采用RNAi技术干扰Aggrecanase后的软骨细胞可以作为组织工程软骨种子细胞,其在材料上分泌Aggrecan的含量明显高于正常软骨细胞,其生物学活性需进一步研究。 王正辉 吴宝俊 Kamal Mustafa关键词:组织工程软骨 RNA干扰 软骨细胞 蛋白聚糖