浙江省科技攻关计划(200C12021-1)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：郭军庆周继勇尹可黄杰黎满香更多>>
- 相关机构：浙江大学湖南农业大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- H5亚型猪流感病毒HA1重组蛋白的制备及间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2008年
- 利用化学合成技术合成H5亚型猪流感病毒(SIV)的HA1基因,克隆到原核表达载体pET-28a(+),构建了重组表达质粒pET28a-HA1/H5,用重组质粒转化表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,以镍螯合层析纯化表达蛋白;通过优化反应条件,建立了基于HA1重组蛋白的H5亚型SIV抗体间接ELISA(iHA1-ELISA)检测方法。SDS-PAGE分析结果显示,在大肠杆菌中成功表达了分子质量为45ku的His-HA1融合蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在;Western-blot分析结果显示,表达蛋白能被抗His单克隆抗体和抗H5亚型SIV阳性血清特异识别。优化iHAI-ELISA中HA1/H5重组蛋白的包被浓度为0.31μg/mL,待检血清的最佳稀释度为1∶100。特异性测定结果显示,iHA1-ELISA方法不与H1、H3、H9亚型猪流感病毒抗体以及猪圆环病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒阳性血清发生交叉反应;iHA1-ELISA方法与血凝抑制试验的符合率达93.5%。表明利用重组HA1蛋白建立的检测H5亚型SIV抗体的ELISA方法具有良好的特异性和敏感性。
- 尹可郭军庆黄杰黎满香周继勇
- 关键词：猪流感病毒H5亚型ELISA
- 抗猪IgG单克隆抗体的制备与应用被引量：2
- 2008年
- 采用辛酸-硫酸铵盐析和SuperdexTM-200凝胶层析分离纯化猪血清IgG,免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得8株稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。Ig亚类分析表明,所制备单克隆抗体的轻链亚类均为κ,重链除6H3为IgG2b外,其余7株均属于IgG1。Western blot分析显示,5株单克隆抗体识别猪IgG轻链,3株单克隆抗体识别猪IgG重链。以蛋白G亲和层析纯化单克隆抗体7H1腹水,用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,结果显示,HRP标记抗猪IgG单克隆抗体对纯化猪IgG的工作浓度达1∶12800。将HRP标记鼠抗猪IgG单克隆抗体与HRP标记羊抗猪IgG多克隆抗体应用于猪血清圆环病毒抗体检测,二者符合率为95.12%,其ELISA和Western blot的工作浓度为1∶2000和1∶10000,表明HRP标记抗猪IgG单克隆抗体具有高度的敏感性。本研究制备的酶标抗猪IgG单克隆抗体为猪病的免疫诊断试剂研究和猪细胞生物学研究提供了一种基础工具。
- 蒋媛媛郭军庆颜焰周继勇
- 关键词：IGG单克隆抗体
