云南省应用基础研究计划面上项目(2009ZC182M)
- 作品数：2 被引量：15H指数：2
- 相关作者：高华峰赵文华杨仕标王金萍更多>>
- 相关机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究计划面上项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 山羊痘和小反刍兽疫病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2013年
- 为实现对山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的同步快速检测,基于GTPV的ITR基因及PPRV的M基因,分别设计合成两套特异性引物及探针;探针分别用5′-FAM-TAMRA-3′及5′-JOE-Eclipse-3′标记物进行标记以实现同步检测。结果显示,所建立的ITR-M二联探针荧光定量RT-PCR方法可同时特异性检测GTPV和PPRV产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒、犬瘟热病毒等相关病毒无荧光信号可检出。以GTPV-ITR和PPRV-M的pMD-18T载体质粒为标准品,构建了双重标准曲线,ITR-M探针的检测敏感度可分别达103拷贝/μL及101.2拷贝/μL cDNA。本研究初步建立了可同步快速检测GTPV和PPRV的二联实时荧光定量RT-PCR法。
- 赵文华杨仕标高华峰
- 关键词：山羊痘病毒小反刍兽疫病毒实时荧光定量RT-PCR探针
- 小反刍兽疫病毒及山羊痘病毒N-ITR基因二联实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：14
- 2014年
- 为实现山羊2种疫病病原体——小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GTPV)的同步快速检测,基于PPRV的N基因及GTPV的ITR基因,分别设计合成2套特异性引物及探针;探针分别用5′FAM-TAMRA3′及5′JOE-Eclipse3′标记物进行标记以实现同步检测。试验结果显示,所建立的N-ITR二联探针实时荧光定量RT-PCR方法可同步检测PPRV和GTPV,产生特异性荧光信号,而对禽痘病毒(FPV)、犬瘟热病毒(CDV)等相关病毒无荧光信号检出。以PPRV-N和GTPVITR的pMD18-T载体质粒为标准品,构建了二联标准曲线,N-ITR探针对PPRV和GTPV的检测敏感度可分别达102和103拷贝/μL。本研究初步建立了可同步快速特异性检测PPRV和GTPV的二联实时荧光定量RT-PCR方法。
- 赵文华杨仕标高华峰王金萍
- 关键词：小反刍兽疫病毒山羊痘病毒探针
