广东省医学科学技术研究基金(A2012757)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李扬秋胡刚陈少华岑东芝杨力建更多>>
- 相关机构：暨南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- pIRES-PML-RARα-IFN-γ重组质粒体外表达检测
- 2018年
- 目的:检测pIRES-PML-RARα-IFN-γ重组质粒在真核细胞中的表达情况,为急性早幼粒细胞白血病DNA疫苗的研发提供资料。方法:将构建成功的pIRES-PML-RARα-IFN-γ重组质粒转染A549细胞株,提取总RNA,逆转录合成c DNA,采用RT-PCR法检测PML-RARα和IFN-γ基因的表达情况。提取转染后A549细胞的上清液采用Western blot和ELISA法检测PML-RARα和IFN-γ蛋白的表达情况。结果:RT-PCR结果证明转染了重组质粒的A549细胞的c DNA中含有相应的目的基因。ELISA和Western blot结果表明,重组质粒能够在A549细胞中表达出相应的目的蛋白。结论:pIRESPML-RARα-IFN-γ重组质粒能够在真核细胞中进行正常的转录及翻译。
- 胡刚胡刚李扬秋
- 关键词：PML-RARΑIFN-Γ早幼粒细胞白血病DNA疫苗
- PML-RARα和IFN-γ重组载体的构建
- 2018年
- 目的:构建PML-RARα融合基因与人干扰素γ(IFN-γ)基因真核双表达载体,为利用DNA疫苗治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)奠定基础。方法:利用PCR技术从APL细胞株(NB4细胞)的RNA中扩增出PML-RARα的部分基因片段,从含有IFN-γ基因的质粒中通过PCR扩增出IFN-γ基因,利用基因克隆技术将PML-RARα和IFN-γ基因片段克隆到p IRES质粒中,然后利用双酶切和序列分析方法验证所构建真核双表达载体的正确性。结果:双酶切结果证明重组载体中含有相应大小的PML-RARα基因片段及IFN-γ基因片段,且序列分析证明重组载体中插入片段的碱基序列均完全正确。结论:构建了含有PML-RARα基因及IFN-γ基因的真核双表达载体,为下一步验证蛋白的表达及DNA疫苗的研制奠定基础。
- 胡刚
- 关键词：PML-RARΑIFN-Γ早幼粒细胞白血病DNA疫苗
- pIRES-PML-RARα重组载体的构建和表达研究
- 2013年
- 目的:采用不同长度的PML-RARα融合基因片段与pIRES质粒构建真核表达载体,并检测其在真核细胞中的表达。方法:利用逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)从NB4细胞的RNA中分别扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp和384 bp的基因片段,并将不同长度的基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性。将重组质粒转染K562细胞,通过RT-PCR和实时荧光定量PCR检测该质粒在真核细胞中的转录。结果:NheⅠ/MluⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将构建的pIRES-PML-RARα质粒转染K562细胞后经RT-PCR和实时荧光定量PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα基因能够在真核细胞中进行正常转录。结论:成功构建了含有不同长度的PML-RARα基因的真核表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录,为研发DNA疫苗用于治疗急性早幼粒细胞白血病提供重要资料。
- 胡刚岑东芝杨力建陈少华周羽竝李扬秋
- 关键词：PML-RARΑ融合基因急性早幼粒细胞白血病DNA疫苗
- PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达被引量：2
- 2013年
- 目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体。用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况。结果双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确。该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译。结论成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料。
- 胡刚周羽竝岑东芝杨力建陈少华李扬秋
- 关键词：PML-RARΑ融合基因急性早幼粒细胞白血病DNA疫苗
