“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09102-237)
- 作品数：5 被引量：23H指数：2
- 相关作者：王文谭文杰邓瑶陈红阮力更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心河北医科大学解放军第305医院更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 免疫抑制剂地塞米松可明显延长乙型肝炎病毒抗原在水动力法转染HBV小鼠模型中的表达被引量：12
- 2010年
- 建立基于高压水动力法的乙型肝炎病毒(HBV)转染小鼠模型,并进一步建立和优化乙肝动物模型研究方法。首先构建了含腺相关病毒倒转末端重复序列元件与包含1.3个拷贝HBV基因组(ayw亚型)的HBV表达质粒(pAAV-HBV1.3);并将pAAV-HBV1.3质粒经高压水动力法尾静脉注射C57BL/6小鼠,不同时间点采集血液和肝组织标本,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg表达;Real-time PCR检测血清及肝组织病毒载量;HE染色、免疫组化染色检测肝组织病理学改变及病毒抗原在肝组织中的定位及表达;最后采用免疫抑制剂地塞米松注射液(DEX)腹腔注射小鼠,建立免疫功能抑制小鼠模型,在此基础上制备乙肝病毒转染小鼠模型,并进行血清HBsAg、HBeAg检测。结果是正常免疫状态下,小鼠转染pAAV-HBV1.3 10d时血清及肝组织HBV相关抗原阳性,30d后HBV相关抗原检测阴性,但30d和60d血清及肝组织病毒载量检测均为阳性,且与对照组差异显著(P<0.01,P<0.05);经地塞米松注射后处于免疫抑制状态下的高压水动力法建立的乙肝病毒转染小鼠,则在60d仍可检测到HBsAg、HBeAg的表达。以上结果表明通过高压水动力法建立了急性乙肝小鼠模型,通过抑制小鼠免疫状态,可延长病毒在小鼠体内存留时间。该模型建立为HBV疫苗评价、药物开发及乙肝相关致病机理研究奠定了基础。
- 郭燕菊王文孙世惠曾道炳赵光宇于虹郭彦谭文杰卢实春周育森
- 关键词：乙型肝炎病毒地塞米松
- 应用慢病毒载体携带HBV基因组DNA制备乙型肝炎病毒感染小鼠模型的影响因素分析被引量：1
- 2017年
- 应用慢病毒载体构建不同HBV转导质粒,通过高压水动力法尾静脉注射小鼠,比较不同HBV转导质粒、剂量(5μg和10μg)、小鼠品系(Balb/c和C57BL/6)及鼠龄(6周龄和18周龄)对建立HBV感染模型的影响。不同的时间点尾静脉采血,ELISA检测血清HBsAg、HBeAg的表达水平及动力变化,Real-time PCR检测血清及肝组织病毒载量;免疫组织化学法检测肝组织HBcAg的定位与表达。1.3倍HBV基因组慢病毒载体转导质粒(pCSHBV1.3)优于1.1倍与1.2倍HBV基因组转导质粒(pCS-HBV1.1or pCS-HBV1.2);pCS-HBV1.3注射Balb/c小鼠后抗原表达维持时间短,抗体出现早;pCS-HBV1.3注射C57BL/6小鼠后,HBsAg、HBeAg抗原表达及血清HBV DNA水平维持时间长;且注射5μg质粒相对于10μg质粒注射小鼠后抗原表达维持时间更长;而6周龄和18周龄小鼠血清均可在较长时间内检测到HBsAg、HBeAg及HBV DNA的表达,但在注射后35周内,前者的表达量均高于后者;所有注射质粒的小鼠肝组织中均可检测到HBcAg的表达,且在血清HBV感染标志转阴时均可检测到肝内HBV DNA的存在。注射质粒的HBV基因组长度、剂量以及宿主的遗传背景均对建立乙肝成体转基因小鼠模型有影响,且发现以5μg含1.3倍HBV基因组的转导质粒pCS-HBV1.3注射6周龄C57BL/6小鼠,HBV抗原表达和HBV DNA水平维持时间长,更适合建立HBV持续感染模型。
- 王文揣侠谭心怡邓瑶谭文杰
- 钙调磷酸酶B亚单位(CnB)作为佐剂对新型乙型肝炎病毒疫苗免疫效果的影响被引量：1
- 2014年
- 比较不同佐剂配伍的效果,探讨常规剂量(5μg)钙调磷酸酶B亚单位(Calcineurin subunit B,CnB)佐剂对含PreS1+S融合抗原的乙型肝炎病毒新型疫苗(HBSS1)免疫效果的影响。采用Al(OH)3、常规剂量(5μg)CnB及CnB+Al(OH)3等佐剂与HBV颗粒疫苗配伍初次免疫,重组腺病毒载体疫苗加强免疫的策略,在C57BL/6小鼠模型上研究不同佐剂对HBV颗粒疫苗肌肉注射后免疫应答的影响,主要包括抗体滴度、抗体亚型分类及特异性细胞免疫(γ-IFN ELISpot检测)。研究结果显示Al(OH)3佐剂存在明显免疫增强作用,而单独加入5μg CnB佐剂或CnB与Al(OH)3佐剂联合应用对Anti-PreS1抗体无明显的增强作用,但可显著降低anti-HBs抗体水平;各免疫组在重组腺病毒载体疫苗加强后,其抗体亚类包括IgG1、IgG2a和IgG2b;并可诱导高水平的细胞免疫应答反应。因而常规剂量(5μg)CnB单独或联合Al(OH)3佐剂对新型HBV疫苗无明显的免疫增强作用。
- 揣侠陈红王文邓瑶阮力谭文杰
- 关键词：乙型肝炎病毒病毒颗粒疫苗
- 不同佐剂对含S+PreS1融合抗原的乙型肝炎病毒颗粒疫苗免疫原性的影响被引量：8
- 2010年
- 本研究在前期工作基础上，用CHO细胞表达的含PreSI＋S融合抗原的新型基因工程HBV颗粒疫苗（HBSS1）与AI（OH）3、CpG及CpG＋Al（OH）3等佐剂配伍，在Balb／C小鼠模型上研究不同佐剂对HBV颗粒疫苗肌肉注射后免疫应答的影响，主要包括抗体滴度、抗体亚型分类及特异性细胞免疫（Y．IFNELISpot检测。结果表明：CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗可快速诱导（单针免疫）高水平的抗PreS1及S抗体，IgG2a／IgG1比率〉1，同时可诱导较高抗原特异的细胞免疫应答；Al（OH）3＋CpG双佐剂组一次免疫后可诱导产生最高的抗S抗体滴度（1：105），其产生的抗体亚类包括IgG1、IgG2a与IgG2b；在S抗原N端（13～49aa）存在优势CTL表位。结论：CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗应是发展新型治疗性乙肝疫苗的较佳选项。
- 陈红邓瑶谭文杰王文殷霄管洁王文玲阮力
- 关键词：乙型肝炎病毒病毒颗粒
- 乙型肝炎病毒DNA疫苗电转加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探索新型有效的HBV治疗性疫苗研制的策略。方法构建含S与PreS1融合基因的HBVDNA疫苗，采用两次蛋白疫苗（含不同佐剂）肌内注射初免，一次DNA疫苗皮内电转免疫加强的联合免疫方式，在小鼠中分析比较了各疫苗所引起的体液与细胞免疫应答。结果HBVDNA疫苗皮内注射加电转可明显增强表面抗原（s）特异的细胞免疫应答（IFN-γ ELISpot分析）及PreS1特异性抗体水平，并以蛋白疫苗加铝佐剂初免组细胞免疫增强效果最明显。结论HBSS1 DNA疫苗结合皮内注射＋电转方式可明显加强含S-PreS1颗粒的蛋白疫苗在小鼠中免疫效果，明显高于蛋白疫苗单独应用。这些研究结果为新型HBV治疗性疫苗的研制与应用提供了依据。
- 陈红张陵林谭文杰邓瑶王文殷霄文波管洁阮力
- 关键词：肝炎病毒乙型疫苗免疫接种
