江苏省高校自然科学研究项目(10KJD310002)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：尤红娟刘转转徐志辉刘雯郑葵阳更多>>
- 相关机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件;亲和层析法纯化重组蛋白;SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定。重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用。结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL。CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用。结论成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉党景东刘转转郑葵阳汤仁仙
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体克隆原核表达凋亡
