广东省自然科学基金(7301461)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：许铭炎邓小玲陈耿臻韩慧更多>>
- 相关机构：汕头大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ADV-tk重组腺病毒的构建及检测被引量：2
- 2010年
- 目的应用基因重组技术,构建含胸苷激酶(tk)自杀基因的复制缺陷型腺病毒(ADV-tk),为进一步研究tk自杀基因对肿瘤的抑制作用奠定基础。方法采用细胞内同源重组法构建携带tk基因的ADV-tk,经PCR鉴定正确后进行扩增、纯化和滴度测定。重组腺病毒ADV-tk体外转染人肝癌SMMC-7721细胞,RT-PCR检测tk基因的整合和表达。建立裸鼠人肝癌动物模型,腹腔注射ADV-tk,荧光显微技术观察ADV-tk基因在肝脏的转染情况和对肿瘤细胞的抑制作用。结果构建的重组腺病毒中带有tk基因,经扩增、纯化后测得重组腺病毒滴度为1.4×1010pfu/ml。ADV-tk体外转染SMMC-7721细胞后,RT-PCR检测显示tk基因在细胞中整合并且有效表达。体内检测结果发现ADV-tk在肝脏有明显转染,肿瘤组织中凋亡细胞明显增多。结论本研究构建的携带tk基因的复制缺陷型腺病毒获得成功,可用于下一步研究。
- 陈耿臻韩慧许铭炎邓小玲
- 关键词：自杀基因胸苷激酶基因腺病毒载体
- 重组腺病毒ADV-TK对肝癌抑制作用的实验研究
- 2010年
- 目的观察已构建的含胸苷激酶(TK)自杀基因的重组腺病毒(ADV-TK)对肝癌细胞的体外杀伤作用和对肝癌裸鼠移植瘤的治疗效果。方法将ADV-TK体外感染人肝癌细胞株SMMC-7721,噻唑蓝(MTT)法检测受感染的SMMC-7721细胞被不同浓度更昔洛韦(GCV)作用后的细胞存活率情况。构建肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤模型,观察肿瘤注射重组腺病毒ADV-TK结合GCV治疗移植瘤的变化。结果相同滴度的重组腺病毒与不同浓度的GCV作用于肝癌细胞株SMMC-7721后,MTT法检测到细胞的存活率随着GCV浓度的增加而不断降低。动物实验中ADV-TK治疗组肿瘤体积明显小于对照组(ADV-null及NS)(P<0.01)。结论重组腺病毒ADV-TK对肝癌SMMC-7721细胞的体外增殖和裸鼠体内的移植瘤生长均有明显的抑制作用。
- 陈耿臻韩慧许铭炎邓小玲
- 关键词：基因治疗胸苷激酶基因腺病毒
- 重组腺病毒ADV-TK基因的构建及其对肝癌细胞的杀伤作用
- 2010年
- 目的探讨含胸苷激酶(TK)自杀基因的重组腺病毒(ADV-TK)对肝癌细胞的杀伤作用。方法采用细胞内同源重组法构建出携带TK基因的ADV-TK,经PCR鉴定正确后进行扩增、纯化和滴度测定,将ADV-TK感染人肝癌细胞株SMMC-7721,MTT法检测受感染的SMMC-7721细胞被不同浓度GCV作用后的细胞存活率情况。结果构建的重组腺病毒中带有TK基因,用相同滴度的重组腺病毒和不同浓度的GCV作用于肝癌细胞株SMMC-7721后,MTT法检测到细胞的存活率随着GCV浓度的增加而不断降低。结论本实验构建的携带TK基因的复制缺陷型腺病毒对肝癌细胞具有明显的杀伤作用。
- 陈耿臻韩慧许铭炎邓小玲
- 关键词：胸苷激酶基因腺病毒载体
