江苏省自然科学基金(BK2005140)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：张双全刘平刘海峰李楠楠王小花更多>>
- 相关机构：南京师范大学山西师范大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 抗菌肽CM4与人可溶性B淋巴细胞因子hsBAFF在大肠杆菌中的融合表达被引量：3
- 2008年
- 为进一步探讨抗菌肽CM4的原核表达及其生物学功能,研究了抗菌肽CM4与人可溶性B淋巴细胞刺激因子hsBAFF的融合表达及抗菌肽CM4的生物学活性。运用PCR把B淋巴细胞因子hsBAFF和家蚕抗菌肽CM4进行基因融合,构建了融合表达载体pET28a(+)/CM4-hsBAFF,并在大肠杆菌中获得高可溶性表达的融合靶蛋白,且存在于超声破碎后的上清,经分子筛Sephadex G-75纯化后的重组融合蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定.SDS-PAGE分析表明:可以通过分子筛一步纯化得到融合蛋白,该重组融合蛋白的分子量约22.0kDa。Western blot结果显示该重组蛋白能与鼠抗人hsBAFF的抗体发生特异性反应.运用基因工程的方法获得CM4-hsBAFF重组融合蛋白,并具有很好的抑菌生物学活性。
- 刘海峰王小花刘平张双全
- 关键词：抗菌肽CM4纯化
- 中国三黄鸡可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆、表达和活性研究
- 2007年
- 通过逆转录-聚合酶链式反应,从中国三黄鸡脾组织细胞中扩增得到459bp的鸡可溶性B淋巴细胞刺激因子(CycsBAFF)基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)后高效表达了带有His6标签的包涵体形式重组蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫转印检测鉴定。表达产物经Ni2+-NTA纯化后,经透析复性得到活性目的蛋白,通过单独刺激以及与PMA共刺激体外培养的鸡法氏囊B细胞,均有明显的促法氏囊B细胞存活的效应。
- 陈舒劼刁振宇张超张双全
- 关键词：基因克隆
- hsBAFF对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖与免疫应答及胞内Ca^(2+)水平的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨大肠杆菌表达的人源可溶性B淋巴细胞激活因子hsBAFF对小鼠脾脏B淋巴细胞免疫反应及其对胞内游离Ca2+信号变化的影响。方法:选择20只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成两组(n=10):①对照组;②hsBAFF实验组。实验组小鼠腹腔注射含hsBAFF(0.1mg/kgbw)的PBS溶液,对照组注射同等剂量的PBS溶液,连续8d。用MTT法检测小鼠脾脏B淋巴细胞的增殖及其对LPS刺激的免疫反应,并用激光共聚焦显微镜分析脾脏B淋巴细胞胞内钙离子水平([Ca2+]i)变化。结果:hsBAFF注射小鼠的脾脏B淋巴细胞增殖和对LPS刺激的免疫反应均明显高于对照组(P<0.05);hsBAFF注射组[Ca2+]i荧光强度维持在相对稳定的高水平上波动,平均荧光强度显著高于对照组(P<0.01),且荧光强度变化率小于对照组。结论:大肠杆菌表达的hsBAFF能促进B淋巴细胞的增殖和免疫应答,从而增强机体免疫功能。hsBAFF激活小鼠脾脏B淋巴细胞可能与[Ca2+]i升高有关。
- 杨筱曼单潇潇陈龙曹鹏张双全
- 关键词：小鼠B淋巴细胞免疫反应CA^2+
- 家蚕抗菌肽CM4和人可溶性BAFF融合基因的克隆、表达及活性鉴定被引量：3
- 2008年
- 采用PCR法从含有人可溶性BAFF基因的pET30a(+)扩增得到人sBAFF基因,通过rPCR将抗菌肽Cecropin CM4基因的2条单核苷酸链进行扩增得到CM4基因,再采用over-lap PCR法通过linker将hsBAFF与Cecropin CM4融合基因相连接.经纯化和鉴定后,定向插入到原核表达载体pET30a(+)中,然后转化E.coliBL21(DE3),通过实验确定了表达该融合基因的最佳诱导条件:IPTG终浓度为1.0mmol/L,诱导时间为5h,温度为30℃,其表达量占全菌蛋白的40%.表达产物经SDS-PAGE分析,得到相对分子质量约为22000的重组蛋白并且存在超声裂解后的上清中.重组蛋白经Western blot检测,结果显示重组蛋白可被鼠抗人可溶性BAFF的抗体识别.采用分子筛Sephadex G-75对重组融合蛋白进行纯化,并经SDS-PAGE对其鉴定.通过对其生物学功能的检测得知,纯化后的重组融合蛋白对大肠杆菌K12D31和真菌有明显的抑菌能力.
- 刘海峰刘平李楠楠张双全
- 关键词：抗菌肽CM4抗菌活性融合基因
